幽门螺杆菌感染对十二指肠黏膜上皮细胞碳酸氢盐转运蛋白表达的影响
发布时间：2019-11-02 11:58
【摘要】：目的探究幽门螺杆菌(HP)感染对小鼠十二指肠上皮细胞碳酸氢盐转运蛋白表达的影响。方法 C57小鼠随机分为四组,三组分别给予HP菌株SS1、NCTC11637、NCTC11639感染,一组仅给予同等量的磷酸盐缓冲液(PBS)灌胃(对照组),2 w后收集组织。体外培养十二指肠上皮细胞,与HP菌株共培养,其中对照组给予等量PBS干预,收集细胞。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹检测组织及细胞中碳酸氢盐转运蛋白表达的影响。结果 HP感染小鼠后,由吉姆萨染色镜检见,感染后可见大量紫蓝色小体,呈逗点状、短棒状;细胞实验:HP菌株NCTC11637与十二指肠上皮细胞共培养后应用RT-PCR扩增HP16srRNA,小鼠及细胞实验均目的基因为单一扩增,扩增良好。小鼠及细胞实验均3种HP菌种囊性纤维跨膜传导调节因子(CFTR)、离子交换体(SLC)26A3及SLC26A6感染2 w后,碳酸氢盐转运蛋白mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P0.05)。结论从体内到体外,HP可通过调控碳酸氢盐转运蛋白含量来干预疾病的进展。
【图文】：
ＲM)溶液中，充分摇匀。取组织碎片，加入含酶的NＲM溶液，37℃水浴，终止消化后离心取细胞沉淀，应用含20ng/ml的表皮生长因子及0.2U/ml的胰岛素的DMEM/F12培养基培养。选取HP菌株培养72h收获，刮取菌落，混于灭菌PBS混匀，加入十二指肠上皮细胞培养液中，按细菌细菌和细胞数量比为的比为100∶1培养，混合培养24h后收集细胞备用。其中对照组予等量PBS溶液干预。1.8统计学方法应用SPSS17.0软件进行t检验。2结果2.1小鼠HP感染的鉴定胃窦黏膜切片，由吉姆萨染色镜检见，HP感染后可见大量紫蓝色小体，呈逗点状、短棒状，见图1;取胃窦黏膜组织，应用ＲT-PCＲ扩增HP16srＲNA，可见，目的基因为单一扩增，扩增良好，退火温度为60℃，其中扩增曲线、溶解曲线及溶解曲线峰图见图2。图1小鼠胃窦黏膜HP感染鉴定2.2HP感染对小鼠碳酸氢盐转运蛋白mＲNA的影响应用ＲT-PCＲ检测HP感染2w后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6的表达变化。CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6均为单一扩增，扩增良好，且与对照组相比，3种菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6mＲNA表达显著低于对照组(均P＜0.05)，见表2，图3。2.3HP感染对小鼠碳酸氢盐转运蛋白的影响应用Western印迹检测HP感染2w后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6的表达变化。与对照组相比，3种菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05)，见图4。邓时莉等幽门螺杆菌感染对十二指肠黏膜上皮细胞碳酸氢盐转运蛋白表达的影响第9期·2087·
图2小鼠16srＲNA的扩增曲线、溶解曲线及溶解曲线峰图2.4HP感染小鼠模型定值密度各型菌株感染小鼠模型，其定值密度无明显差异(P＞0.05)，见表3。因此随机选取标准菌株NCTC11637进行后续细胞实验。2.5原代培养的十二指肠上皮细胞培养正常培养的十二指肠上皮细胞，以取出细胞开始培养为0h，24～48h细胞开始贴壁，7～8d细胞开始增殖，10～14d时细胞开始融合，见图5。取十二指肠上皮细胞，应用ＲT-PCＲ扩增HP16srＲNA，可见，目的基因为单一扩增，扩增良好，退火温度为60℃，其中扩增曲线，溶解曲线及溶解曲线峰图见图6。2.6HP感染对十二指肠上皮细胞碳酸氢盐转运蛋白mＲNA的影响应用ＲT-PCＲ检测HP与十二指肠上皮细胞共培养24h后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6mＲNA的表达变化。与对照组相比，NCTC11637菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6mＲNA表达显著低于对照组(P＜0.05)，见表4。2.7HP感染对十二指肠上皮细胞共培养24h后碳酸氢盐转运蛋白的影响与对照组相比，3种菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6蛋白表达显著低于对照组(均P＜0.05)，，见图7。表2HP感染小鼠后2w碳酸氢盐转运蛋白mＲNA的表达水平(x±s，n=12)指标CFTＲSLC26A3SLC26A6对照组2.79±0.742.29±0.711.36±0.63NCTC116391.61±0.891)0.59±0.311)0.51±0.221)NCTC116371.69±0.591)0.99±0.311)1.01±0.211)标准株SS11.11±0.791)0.41±0.301)0.61±0.111)与对照组比较:1)P＜0.05;表4同表3各菌株HP感染小鼠定值密度分析〔n(%)，n=12〕菌株轻度中度重度标准株SS17(58.3)3(25.0)2(16.7)NCTC116376(50.0)4(33.3)2(16.7)NCTC116397(58.3)2(16.7)3(25.0)图3HP感染小鼠后2wCFTＲ、SLC26A3、SLC26A6mＲNA的表达水平·2088·中国老年学杂志2017年5月第37卷
本文编号：2554481
【图文】：
ＲM)溶液中，充分摇匀。取组织碎片，加入含酶的NＲM溶液，37℃水浴，终止消化后离心取细胞沉淀，应用含20ng/ml的表皮生长因子及0.2U/ml的胰岛素的DMEM/F12培养基培养。选取HP菌株培养72h收获，刮取菌落，混于灭菌PBS混匀，加入十二指肠上皮细胞培养液中，按细菌细菌和细胞数量比为的比为100∶1培养，混合培养24h后收集细胞备用。其中对照组予等量PBS溶液干预。1.8统计学方法应用SPSS17.0软件进行t检验。2结果2.1小鼠HP感染的鉴定胃窦黏膜切片，由吉姆萨染色镜检见，HP感染后可见大量紫蓝色小体，呈逗点状、短棒状，见图1;取胃窦黏膜组织，应用ＲT-PCＲ扩增HP16srＲNA，可见，目的基因为单一扩增，扩增良好，退火温度为60℃，其中扩增曲线、溶解曲线及溶解曲线峰图见图2。图1小鼠胃窦黏膜HP感染鉴定2.2HP感染对小鼠碳酸氢盐转运蛋白mＲNA的影响应用ＲT-PCＲ检测HP感染2w后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6的表达变化。CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6均为单一扩增，扩增良好，且与对照组相比，3种菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6mＲNA表达显著低于对照组(均P＜0.05)，见表2，图3。2.3HP感染对小鼠碳酸氢盐转运蛋白的影响应用Western印迹检测HP感染2w后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6的表达变化。与对照组相比，3种菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6蛋白表达显著低于对照组(P＜0.05)，见图4。邓时莉等幽门螺杆菌感染对十二指肠黏膜上皮细胞碳酸氢盐转运蛋白表达的影响第9期·2087·
图2小鼠16srＲNA的扩增曲线、溶解曲线及溶解曲线峰图2.4HP感染小鼠模型定值密度各型菌株感染小鼠模型，其定值密度无明显差异(P＞0.05)，见表3。因此随机选取标准菌株NCTC11637进行后续细胞实验。2.5原代培养的十二指肠上皮细胞培养正常培养的十二指肠上皮细胞，以取出细胞开始培养为0h，24～48h细胞开始贴壁，7～8d细胞开始增殖，10～14d时细胞开始融合，见图5。取十二指肠上皮细胞，应用ＲT-PCＲ扩增HP16srＲNA，可见，目的基因为单一扩增，扩增良好，退火温度为60℃，其中扩增曲线，溶解曲线及溶解曲线峰图见图6。2.6HP感染对十二指肠上皮细胞碳酸氢盐转运蛋白mＲNA的影响应用ＲT-PCＲ检测HP与十二指肠上皮细胞共培养24h后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6mＲNA的表达变化。与对照组相比，NCTC11637菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6mＲNA表达显著低于对照组(P＜0.05)，见表4。2.7HP感染对十二指肠上皮细胞共培养24h后碳酸氢盐转运蛋白的影响与对照组相比，3种菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6蛋白表达显著低于对照组(均P＜0.05)，，见图7。表2HP感染小鼠后2w碳酸氢盐转运蛋白mＲNA的表达水平(x±s，n=12)指标CFTＲSLC26A3SLC26A6对照组2.79±0.742.29±0.711.36±0.63NCTC116391.61±0.891)0.59±0.311)0.51±0.221)NCTC116371.69±0.591)0.99±0.311)1.01±0.211)标准株SS11.11±0.791)0.41±0.301)0.61±0.111)与对照组比较:1)P＜0.05;表4同表3各菌株HP感染小鼠定值密度分析〔n(%)，n=12〕菌株轻度中度重度标准株SS17(58.3)3(25.0)2(16.7)NCTC116376(50.0)4(33.3)2(16.7)NCTC116397(58.3)2(16.7)3(25.0)图3HP感染小鼠后2wCFTＲ、SLC26A3、SLC26A6mＲNA的表达水平·2088·中国老年学杂志2017年5月第37卷
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1 周春浩;粘液-碳酸氢盐屏障[J];国外医学(消化系疾病分册);1988年03期
本文编号：2554481
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