水通道蛋白在小鼠小肠中的表达和定位

发布时间：2020-01-31 08:23

【摘要】：探明水通道蛋白在小鼠小肠中的表达及定位,为研究小肠水转运过程中的细胞和分子机制奠定理论基础。本文运用RT-PCR和免疫印迹技术检测小鼠十二指肠、空肠和回肠中水通道蛋白的表达情况,结果显示,AQP3在小鼠空肠中存在基因和蛋白表达,AQP4在小鼠回肠中存在基因和蛋白表达。为进一步明确这两种水通道蛋白在小肠中的表达位置,通过免疫组织化学的方法进一步证实AQP3主要表达在小鼠空肠黏膜上皮细胞,而AQP4主要表达在小鼠回肠隐窝细胞基底膜。
【图文】：

凝胶电泳,小鼠

。1．2．4免疫组织化学4%多聚甲醛灌注小鼠，取小鼠空肠和回肠各约2cm，继续用4%多聚甲醛固定标本24h，石蜡包埋，6μm连续切片。经二甲苯脱蜡、梯度乙醇再水化后，置入10mmol/L柠檬酸缓冲液(pH值6．0)微波修复抗原5min，室温冷却，PBS漂洗。10%非免疫羊血清封闭2h，分别用兔抗小鼠AQP3(1∶500稀释)、AQP4抗体(1∶500稀释)置于湿盒内4℃孵育过夜。多次冲洗后，加入辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG室温孵育15min，PBS漂洗3次，DAB显色，，光学显微镜下观察并拍照，棕黄色颗粒为阳性结果。2试验结果2．1总ＲNA质量分析如图1所示，分别从小鼠十二指肠、空肠和回肠组织中提取总ＲNA，用1%非变性琼脂糖凝胶电泳进行检测。电泳结果显示，28S、18S和5S三条泳带均清晰、完整，且其亮度比基本符合2∶1，表明所提取的ＲNA未降解。测定并计算260nm和280nm紫外光吸收值OD260/OD280=1．9，表明提取的ＲNA纯度较高，质量可靠，可用于进行ＲT-PCＲ试验。图1总ＲNA凝胶电泳图a:十二指肠;b:空肠;c:回肠2．2ＲT-PCＲ检测小鼠小肠各段AQPs基因的表达应用小鼠AQPs特异性引物对十二指肠、空肠和回肠组织进行ＲT-PCＲ分析，以β-actin为内参，结果如图2所示，小鼠的空肠段存在AQP3基因表达，小鼠的回肠段存在AQP4基因表达。而小鼠的十二指肠段，没有检测到水通道蛋白基因的表达。图2ＲT-PCＲ检测AQPs基因在小鼠十二指肠、空肠、回肠中的表达M:DL-2000Marker;A:β-actin为内参;O:AQPO;1:AQP1;2:AQP2;3:AQP3;4:AQP4;5:AQP5;6:AQP6;7:AQP7;8:AQP8;9:AQP9;10:AQP10;11:AQP11;12:AQP122．3WesternBlot检测水通道蛋白AQP3和AQP4的106

十二指肠,空肠,小鼠,基因

荆嘁直鸫有∈?十二指肠、空肠和回肠组织中提取总ＲNA，用1%非变性琼脂糖凝胶电泳进行检测。电泳结果显示，28S、18S和5S三条泳带均清晰、完整，且其亮度比基本符合2∶1，表明所提取的ＲNA未降解。测定并计算260nm和280nm紫外光吸收值OD260/OD280=1．9，表明提取的ＲNA纯度较高，质量可靠，可用于进行ＲT-PCＲ试验。图1总ＲNA凝胶电泳图a:十二指肠;b:空肠;c:回肠2．2ＲT-PCＲ检测小鼠小肠各段AQPs基因的表达应用小鼠AQPs特异性引物对十二指肠、空肠和回肠组织进行ＲT-PCＲ分析，以β-actin为内参，结果如图2所示，小鼠的空肠段存在AQP3基因表达，小鼠的回肠段存在AQP4基因表达。而小鼠的十二指肠段，没有检测到水通道蛋白基因的表达。图2ＲT-PCＲ检测AQPs基因在小鼠十二指肠、空肠、回肠中的表达M:DL-2000Marker;A:β-actin为内参;O:AQPO;1:AQP1;2:AQP2;3:AQP3;4:AQP4;5:AQP5;6:AQP6;7:AQP7;8:AQP8;9:AQP9;10:AQP10;11:AQP11;12:AQP122．3WesternBlot检测水通道蛋白AQP3和AQP4的106

【相似文献】