巨噬细胞凋亡抑制因子CD5L在炎性肝损伤中的作用及其生物学功能初探

发布时间：2020-03-24 04:09

【摘要】：目的:已有许多研究表明,巨噬细胞凋亡抑制因子(Apoptosis inhibitor of macrophage,AIM/CD5L)在脂质内稳态平衡的调节与自身免疫疾病中发挥着重要的作用,但是其在炎性肝损伤中的作用目前尚不明确。补体B因子(Complement factor B,CFB)在许多免疫反应中起着重要的作用,但并无研究提出CFB与CD5L之间是否能够相互作用。本研究旨在探讨CD5L基因在乙酰氨基酚(APAP)诱导的药物性肝损伤中的作用,CD5L和CFB能否相互作用及两者在肝脏炎症相关模型中的功能初探。方法:我们建立APAP诱导的野生型(WT)小鼠及CD5L~(-/-)基因缺陷小鼠急性肝损伤模型,检测血清中ALT、AST水平,对小鼠肝脏进行HE染色,观察肝脏损伤情况;通过免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)、酶联免疫吸附测定(ELISA)实验和兔红细胞溶血实验来验证CD5L与CFB之间存在是否存在相互作用;;通过实时荧光定量核酸扩增检测系统(RT-qPCR)检测人单核巨噬细胞THP-1的M1-M2分型转化实验和人肝星状细胞(LX02)纤维化实验中相关基因的表达情况;通过免疫印迹试验(Western Blot)检测THP-1炎症相关蛋白的活化情况。结果:采用药物APAP刺激后,CD5L~(-/-)基因敲除鼠较WT小鼠表现出更严重的肝脏损伤,ALT和AST水平更高,且肝脏中坏死和凋亡的细胞更多,范围更大;Co-IP和ELISA实验证实CD5L与CFB之间存在相互作用;CD5L能够抑制CFB介导的兔红细胞的溶血反应;CD5L使THP-1巨噬细胞向M2分型转化,CFB诱导巨噬细胞向M1分型转化,在同时加入CD5L及CFB时,巨噬细胞无明显M1或M2分型转化趋势;CD5L能够促进由TGF-β和LPS诱导的人肝星状细胞(LX02)的纤维化,而CFB对于LX02纤维化无明显作用;CD5L蛋白能够使THP-1细胞中Akt、ERK蛋白磷酸化,但CFB无法对CD5L介导的Akt、ERK蛋白磷酸化产生影响。结论:CD5L基因的敲除可使由APAP诱导的小鼠药物性肝损伤加重,CD5L蛋白能够减轻肝脏炎症的发生;CD5L与CFB之间存在相互作用,在红细胞溶血反应及THP-1细胞分型实验中也存在着生物学功能上的拮抗作用。CD5L能够降低TGF-β和LPS诱导产生的肝星状细胞纤维化;CD5L能够刺激THP-1细胞中Akt和ERK的活化。
【图文】：

图 1. CD5L 缺陷小鼠的构建与鉴定（a）通过 CRISPR/Cas9 基因敲除技术，，将位于小鼠基因组 Chr 3, GRCm38.p3的 CD5L 基因外显子 2 到外显子 5 进行敲除；（b）使用 Western Blot 免疫印迹法，检测 CD5L-/-及 WT 小鼠肝脏中表达 CD5L 蛋白的情况。

图 2.CD5L 基因的敲除可使由 APAP 诱导的小鼠药物性肝损伤加重（a）（b）腹腔注射 APAP 后８小时和 24 小时，WT 和 CD5L-/-小鼠血清中 ALT、AST 水平。每组小鼠 5-6 只。当*P＜0.05，则认为组间差异有统计学意义。（c）WT 和 CD5L-/-小鼠肝脏组织 HE 染色的图像（100X）。在 CD5L-/-小鼠中可以观察
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R575

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本文编号：2597770