外源性胰岛素样生长因子-1对重症急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障保护作用的实验研究

发布时间：2020-03-27 18:07

【摘要】： 目的:观察外源性胰岛素样生长因子—1(IGF-Ⅰ)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠粘膜屏障功能的保护作用及其机制,为SAP的治疗寻求新的途径并提供理论依据。方法:72只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、IGF-Ⅰ治疗组(IGF-Ⅰ组)共三组,每组24只。每组再分为3个时相点(6,12,24h),每个时相点8只。通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型,假手术组用同样方法经胰胆管逆行注射生理盐水。IGF-Ⅰ组分别于术前半小时和术后3小时经后肢内侧皮下注射IGF-Ⅰ,各组动物分别于术后6、12、24小时处死8只,检测各组大鼠血浆淀粉酶、内毒素及二胺氧化酶,观察胰腺及小肠组织病理学变化并进行评分,TUNEL法检测小肠上皮细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测小肠上皮细胞中bax和bcl-2 mRNA的表达。结果:IGF-Ⅰ治疗组与SAP组各时相点相比,血浆淀粉酶(6h:2262.38±760.19 vs 3063.38±676.33;12h:1572.50±635.90 vs 2777.00±262.25;24h:1322.75±334.64 vs 2336.38±279.92)均低于各相应时相点,差异于12h和24h有统计学意义,均P＜0.05;内毒素(6h:115.00±29.76 vs 77.75±28.49;12h:76.25±10.60vs 103.13±27.38;24h:53.75±10.61 vs147.50±16.691于6h时IGF-Ⅰ治疗组仍高于SAP组,而12h和24h时低于SAP组,但差异仅于24h有统计学意义,P＜0.05;二胺氧化酶(6h:2.39±0.53vs 0.99±0.50;12h:1.61±0.48 vs 1.94±0.42;24h:0.96±0.18 vs 2.81±0.801水平6h时IGF-Ⅰ治疗组仍高于SAP组,差异有统计学意义,12h及24h时IGF-Ⅰ治疗组较SAP组降低,但差异仅在24h时有统计学意义。小肠粘膜上皮细胞凋亡指数IGF-Ⅰ组与SAP组各相应时相点相比均显著降低(6h:13.88±1.73vs 19.00±2.78;12h:10.13±1.55 vs 17.63±1.60;24h:9.50±1.07 vs 17.25±2.76),小肠病理评分IGF-Ⅰ治疗组较SAP组各相应时相点均降低(6h:1.63±0.52vs 2.38±0.51;12h:1.38±0.52 vs 2.88±0.69;24h:1.25±0.46 vs 2.15±0.71),但差异只在12h和24h时有统计学意义;电镜检查结果亦显示IGF-Ⅰ治疗组小肠组织病理变化较SAP组明显改善;小肠组织中bax mRNA表达在SAP组各时相点较SO组相应时相点明显增高(6h:1.35±0.18vs 0.85±0.12;12h:1.21±0.21vs 0.86±0.24;24h:1.14+0.24 vs 0.95±0.22),6小时即达高峰,而在IGF-Ⅰ组的表达与SAP组相应时相点比较则明显减弱(6h:1.10±0.23vs 1.35±0.18;12h:1.03±0.15 vs 1.21±0.21;24h:0.96±0.16 vs 1.14+0.24),差异在12h和24h有统计学意义(P＜0.05),于24小时即接近SO组;bcl-2 mRNA的表达在SO组和SAP组均较弱且无明显差异(6h:0.54±0.04vs 0.57±0.06;12h:0.56±0.05 vs 0.53±0.05;24h:0.54±0.07 vs 0.58±0.08),而在IGF-Ⅰ组各时相点的表达则与SO组和SAP组相比明显增强(6h:0.65±0.07vs 0.54±0.04vs0.57±0.06;12h:0.69±0.04vs 0.56±0.05 vs 0.53±0.05;24h:0.72±0.05vs 0.54±0.07 vs 0.58±0.08),差异均有统计学意义。SAP组bax,bcl-2 mRNA表达的比值明显高于SO组(6h:2.24±0.11vs 1.59±0.24;12h:2.10±0.20 vs 1.55±0.19;24h:2.06±0..21 vs 1.55±0.18),而IGF-Ⅰ组则明显低于SAP组(6h:1.69±0.28vs 2.24±0.11;12h:1.41±0.19 vs 2.10±0.20;24h:1.21±0.23 vs 2.06±0..21),差异均有统计学意义(均P＜0.05)。结论:肠粘膜上皮细胞凋亡参与了SAP时肠屏障功能障碍的发生,外源性IGF-Ⅰ可以抑制SAP时肠粘膜上皮细胞的过度凋亡,减轻内毒素血症,其机制可能与IGF-Ⅰ促进bcl-2 mRNA的转录、抑制bax mRNA的表达相关,从而对肠粘膜屏障具有一定的保护作用。
【图文】：

小肠,二胺氧化酶,血浆内毒素,内毒素移位

肠炎、小肠切除、烧伤等所致的肠豁膜损伤实验研究现，给予外源性IGF一1恢复循环中IG矛esl水平后，上皮细胞DNA、蛋白质合成增加，肠豁膜结构和功均得到不同程度恢复。另外有研究表明IGfesl对各组织的细胞凋亡均有·定的抑制作用卜司。我们的研发现，S八卫时血浆内毒素、二胺氧化酶在各时相点均于so组，同时肠勃膜细胞亦存在着明显的凋亡，并凋亡指数与血浆内毒素、二胺氧化酶的浓度均及肠伤评分均呈正相关，这说明SA卫早期肠乳膜上皮细的过度凋亡参与了肠豁膜屏障的损害病理过程，从出现肠内细菌及内毒素移位。到后期随着肠损伤的一步加重，内毒素移位也更明显，这种作用又反过来一步加重肠豁膜屏障的损害。而经IGF一l治疗后，大血浆内毒素及二胺氧化酶的浓度及小肠豁膜上皮细凋亡率均明显下降，小肠组织结构也显著改善。因此们认为，外源性IG田一1通过抑制SA卫时肠豁膜上皮胞的过度凋亡，从而对肠豁膜屏障起到保护作用，降了细菌和内毒索移位的发生。Pu，劝enthi等侧发现的影响及最佳剂量、副作用等方面的问题均有待于进一步探讨。参考文献〔1]王兴鹏，王冰娴，吴恺，等.细胞凋亡在急性坏死型胰腺炎早期肠酬剿波细胞赶泊中的作用.中婀肖倪场琶志，2001，21(5):267一270.[2〕Bareg却ianN，，SongJ，Je，ehke肪，et二1.IG卜1protee-t5inte，tinalePithelialeellsfromoxidativestres只-indueedapoptosis二丁SurgRes2006，136(l):31一37.[31ChiuCJ，流axdle阴，BrownR，。tal.Intostinolmueo-sal一lesioninlowflowstatesI.AmorPhologieal，hemo-dynamie，andmetaboliezeappraisal.Ax℃hsul、g，1970101(4):478一483.[4〕ButturiniG，SalviaR.BettiniR，。tal.Infoeti‘川pfovont-ioninneerotizingPanereatitis:ano]dehallengewithnewperspee
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R576

【引证文献】