应用蛋白组学及MiSeq测序技术研究姜黄素与利拉鲁肽改善大鼠非酒精性脂肪性肝病分子机制

发布时间：2020-03-28 06:18

【摘要】：研究目的:应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白组学及MiSeq测序技术分别探讨姜黄素及利拉鲁肽改善大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)分子机制。研究方法:(1)将24只SD大鼠随机分为普食组(8只),高脂组(16只),分别饲以普通饲料和高脂饲料,12周后高脂组随机分为高脂组(8只)与姜黄素组(8只),高脂组继续高脂饲料,姜黄素组高脂饲料+姜黄素灌胃(200 mg/kg/日)处理。16周后所有大鼠麻醉后断颈法处死,收集肝脏,血清标本,油红O染色法检测肝脏组织病理,酶联免疫吸附实验(ELISA)法测肝脏甘油三酯含量、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及雌二醇水平。iTRAQ标记蛋白组学测肝脏组织蛋白表达情况,实时定量多聚酶链反应(RT-qPCR)测β-actin、17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA表达水平。(2)将24只SD大鼠随机分为普食组(8只),高脂组(16只),分别饲以普通饲料和高脂饲料,12周后高脂组随机分为高脂组(8只)与利拉鲁肽组(8只),高脂组继续高脂饲料,利拉鲁肽组高脂饲料+利拉鲁肽皮下注射(0.4mg/kg/日)处理。16周后所有大鼠麻醉后断颈法处死,收集肝脏、小肠、血清及粪便标本,油红O染色法检测肝脏组织病理,ELISA法测肝脏甘油三酯含量及血清ALT、AST、肿瘤坏死因子α(TNFα)、脂多糖(LPS)、二胺氧化酶(DAO)水平,电镜观察大鼠肠道病理,MiSeq测序检测肠道菌群变化。实验结果:(1)姜黄素明显减少高脂饮食促发的肝脏脂滴沉积,减少肝脏甘油三酯含量(P0.05),降低血清ALT水平(P0.05),升高血清雌二醇水平(P0.05)。肝组织iTRAQ蛋白组学结果显示谷胱甘肽-S-转移酶α2、Ras相关蛋白Rab13和视黄醇脱氢酶2在普食组和姜黄素组较高脂组表达明显升高,蛋白磷酸酶1G和17β-HSD2在普食组和姜黄素组较高脂组表达明显降低;RT-qPCR显示普食组和姜黄素组17β-HSD2 mRNA表达量较高脂组明显降低(P0.05),PCG-1α和PPARαmRNA表达量在普食组和姜黄素组较高脂组明显升高(P0.05)。(2)利拉鲁肽显著减少高脂饮食诱发的肝脏脂滴沉积,降低肝脏甘油三酯含量(P0.05),降低血清ALT、TNFα、LPS、DAO水平(P0.05)。α多样性分析显示,与普食组相比,高脂组和利拉鲁肽组肠道菌群丰富度均显著下降(P0.05),物种多样性改变不明显。β多样性分析显示,3组肠道菌群结构间存在明显相互差异。100种OTUs在3组间存在明显差异,其中78种OTUs与7项代谢异常及慢性炎症指标中至少一项存在显著相关性,其中23种与7项指标呈正相关的OTUs在普食组和利拉鲁肽组均明显低于高脂组(P0.05),5种与7项指标呈负相关的OTUs在普食组和利拉鲁肽组均明显高于高脂组(P0.05)。研究结论:(1)姜黄素可能通过抑制肝脏17β-HSD2,增加血清雌二醇水平改善高脂促发的大鼠NAFLD。(2)利拉鲁肽可能通过调节肠道菌群,降低体重,改善体内慢性炎症改善高脂诱发的大鼠NAFLD。
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R575.5

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本文编号：2604057