血清乙型肝炎病毒顿挫型转录体阳性特殊感染状态的动态观察

发布时间：2020-03-28 15:56

【摘要】：研究背景:乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)感染在我国依然是全国性的公共健康问题,人群中慢性乙肝病毒携带率近10%,而母婴传播是形成慢性HBV感染的重要原因。据估计我国的慢性HBV感染约有30%-50%是通过母婴传播发生的。虽然新生儿免疫接种已经取得了巨大的成就,但仍有部分免疫失败。有些婴儿虽已产生抗体,但并不完全处于安全状态。本课题组前期基于血清HBV转录体检测的研究表明,既使经过免疫治疗和接种,大部分HBsAg(+)孕妇所生的新生儿血清中仍可检测到顿挫型转录体(truncated RNA,trRNA),且是新生儿出生时唯一可检测到的HBV血清学标志物。trRNA是一个潜在的诊断低复制特殊HBV感染状态的新的标志物,但这种特殊感染状态的稳定性及其临床意义尚待进一步明确。在治疗慢性HBV感染中,拉米夫定能快速、有效地抑制HBV复制,但不能完全清除病毒,停药后易复发,也有耐药问题。拉米夫定为核苷类药物,通过抑制HBV多聚酶的活性阻断HBV复制,作用靶位是HBV聚合酶反转录活性区YMDD基因,长期应用可致病毒耐药变异。拉米夫定的阻断效果必会导致大量HBV复制中间体的产生,这些中间体是不完整不成熟的。前期拉米夫定治疗对血清HBV转录体影响的研究中表明,XDNA检测能更真实地反映病毒含量的变化,也可能是反映患者耐药的早期血清学标志物,同时发现在停药时HBV血清标志物均阴性但trRNA始终稳定表达,提示HBV感染状态的持续,trRNA有可能作为预测拉米夫定治疗停药后反跳的血清标志物。目的:本研究拟在前期研究的基础上,对HBsAg(+)孕妇及其所生新生儿进行动态观察,探讨trRNA确定的早期特殊感染状态是否稳定,是否会引起HBV感染活动性改变及影响因素。同时选择随访拉米夫定治疗出现停药后反跳的慢性HBV感染病例模型,探讨trRNA的动态变化规律及其在停药后反跳预警中的作用。方法:跟踪随访90例HBsAg阳性孕妇及所生新生儿,孕妇在接受HBIG治疗前和分娩前各采血1次,新生儿在出生后24h内、1、3、6、9、12月各采血1次,检测trRNA、fRNA、乙肝五项和HBVDNA定量,按新生儿trRNA分组比较新生儿HBV活动性感染的发生率,按母亲HBIG治疗、HBeAg、HBVDNA定量分别分组比较母婴trRNA、fRNA的阳性率。选择100例拉米夫定治疗停药反跳的病例模型,从治疗始每3个月采血1次,随访24个月,观察分析HBVDNA、HBsAg、HBeAg、ALT、YMDD突变和HBVX区DNA、fRNA/trRNA的变化规律。结果:随访的新生儿12个月内无HBV活动性感染发生,新生儿fRNA均阴性。分别以母婴是否行HBIG治疗分组,比较新生儿trRNA检出率,差别均无统计学意义(χ2=1.208,P=0.272;χ2=2.225,P=0.136);以母亲HBeAg分组,分别比较母婴trRNA检出率,差别无统计学意义(χ2=0.008,P=0.928;χ2=0.694,P=0.405),而母亲fRNA检出率差别有统计学意义(χ2=10.565,P=0.001);以孕妇产前HBVDNA定量分组,同样分别比较母婴trRNA检出率,差别无统计学意义(χ2=4.349,P=0.226;χ2=3.182,P=0.364),而母亲fRNA的检出率差别有统计学意义(χ2=21.193,P=0.000)。入选的100例拉米夫定治疗的患者均成功动态观察24个月。所有患者在治疗满3-6个月期间均有程度不同的治疗反应,HBVDNA和fRNA定量均迅速下降至低水平,其中78例转阴,HBeAg血清转换率24%(HBeAg消失±anti-HBe),继续巩固治疗至满12个月后停药。停药时共91例HBVDNA和fRNA均阴性,余下9例也均降至低水平(105copies/ml)。HBeAg血清转换率28%,ALT均恢复正常,YMDD变异检测均阴性。停药后继续观察12个月,所有患者均出现不同程度的反跳,HBeAg复阳性率32.12%(9/28)。HBVDNA、fRNA的变化规律相同,由高降低至消失,停药后又不同程度地升高,而trRNA在治疗停药及反跳的全过程中始终稳定持续表达。结论:在随访的12个月内,新生儿trRNA阳性与否不受母婴是否行HBIG治疗、HBeAg和HBVDNA定量的影响,这种特殊感染状态是稳定的,这可能是新生儿今后发生开放性感染的病理学基础。 trRNA是一个潜在的预测拉米夫定治疗慢性HBV感染停药反跳的血清学标志物。
【图文】：

琼脂,片段,锥形,基因

图 1 各目标片段在 HB V 基因组中的位置示意图 5 琼脂糖凝胶电泳EB ，琼脂糖， 1× TA E 缓冲液，D N A M a rk er ， 6 ×溴酚蓝加样缓冲液。 1 ）配胶称取琼脂糖 1 g 放于锥形瓶，加入 1 ×T A E 缓冲液

示意图,尼龙,示意图

将凝胶放置干燥玻璃皿内，切除凝胶多余部以便易辨认。中加入变性液，浸泡约 3 0m i n 并不断摇动，，使 DN 剪一张比凝胶略大一点的 Hy b o n d- N+尼龙膜，膜先浸入变性液中 15 m i n。细原理使凝胶中变性的 DN A 转移到膜上，具体放时间为 18 - 2 2 h 。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R512.62

【参考文献】