NK细胞功能与HCV感染及抗病毒治疗转归的研究

发布时间：2020-03-31 19:24

【摘要】：目的 1.研究NK细胞功能与HCV感染及抗病毒治疗后不同转归间的关系; 2.比较丙型肝炎患者NK细胞功能的体内外差异; 3.探讨丙肝患者抗病毒治疗过程中NK细胞功能的动态变化及其与病毒载量、基因型的关系。方法 1.病例:(1)慢性HCV感染患者49例,其中未治疗者30例,应用IFN-α联合利巴韦林治疗者19例(2)感染HCV后自发清除病毒者5例(3)经过抗病毒治疗后持续病毒学应答患者18例(4)经过抗病毒治疗后非持续病毒学应答患者17例(5)健康对照18例。已排除其它病毒合并感染,取外周肝素钠抗凝血备检。 2.采用ELISA检测HCV抗体,序列特异性引物聚合酶链反应(SSP-PCR)方法检测HCV基因分型。应用Real time-PCR定量检测HCV-RNA水平,包括未治疗、治疗后持续或非持续应答及自发恢复的丙肝患者在入组时;接受治疗的病人在治疗前及治疗4周、12周、24周时间点。 3.采用易得人淋巴细胞分离管分离出外周血单个核细胞(PBMC),利用CFSE/PI染色方法检测NK细胞对K562细胞的杀伤活性。 4.流式染色技术检测NK细胞及其亚型的频率,NK细胞表面激活及抑制性受体的频率,细胞内细胞因子染色检测细胞因子IFN-γ及TNF-α的分泌情况。 5.将一部分健康对照及慢性丙肝患者分离出的PBMC加入细胞因子(rh IL-2及rh IL-15)进行体外培养,72h后检测NK细胞表面受体及分泌细胞因子的变化。 6. Flowjo Software对流式图进行处理,SPSS13.0对数据进行统计分析,p值0.05认为有显著差异性。结果 1.慢性HCV感染及治疗后不同转归患者组间NK细胞、亚型、表面受体、杀伤活性及分泌细胞因子频率的比较 (1)慢性丙肝患者外周血NK细胞杀伤活性,表达受体NKG2D及分泌细胞因子IFN-γ, TNF-α频率明显低于健康对照组(p0.01),受体NKG2C显著低于自发恢复组(p0.01);受体NKp30, NKp44及NKG2A显著低于持续应答组(p0.05)。 (2)与治疗后持续应答患者相比,非持续应答者NK细胞杀伤活性显著减低(p0.01);此外其杀伤活性,受体NKG2D及分泌细胞因子IFN-γ, TNF-α频率明显低于健康对照,受体NKG2A则相反(p0.05)。 (3)持续应答患者NK细胞表面活化性受体NKp46,NKp30,NKp44,NKG2D及NKG2A与较非持续应答者高,分泌细胞因子IFN-γ, TNF-α能力亦较强,但没有达到统计学差异。 (4)自发恢复的HCV感染者外周血NK细胞、受体NKp46、NKG2C及分泌细胞因子TNF-α频率高于非持续应答患者(p0.05)。 2.体外培养后,慢性HCV感染患者NK细胞频率降低,显著低于健康对照组培养以后(p0.01),但受体NKG2A及NKG2C频率增加,高于健康对照组(p0.05)。非持续应答组细胞体外培养后,NK细胞分泌IFN-γ及TNF-α均低于健康对照组培养后(p0.05)。 3.慢性丙肝患者及非持续应答患者血清病毒滴度及ALT水平与NK细胞功能无相关性。 4.慢性丙肝患者治疗过程中NK细胞、亚型及表面受体的频率和功能活性变化 (1)低病毒载量及非基因1型患者CD56dim NK细胞频率下降,CD56bright NK细胞频率增加。 (2)低病毒载量及非基因1型患者抑制性受体NKG2A频率增加,高病毒载量及基因1型患者活化性受体NKG2D减少。 (3)高病毒载量及基因1型患者NK细胞分泌细胞因子IFN-γ, TNF-α能力下降结论 1.NK细胞功能与HCV感染及治疗后转归有关,慢性HCV感染者体内NK细胞功能受损,自发恢复者及治疗持续应答患者NK细胞活性高于慢性丙肝患者及非持续应答患者。 2.慢性丙肝患者体内外NK细胞功能与健康人存在差别。 3.慢性丙肝患者及非持续应答患者血清病毒滴度、ALT水平与NK细胞功能无相关性。 4.与低病毒载量及非基因1型患者相比,高病毒载量及基因1型患者在抗病毒治疗过程中NK细胞功能活性没有得到改善甚至降低。本课题的创新点 1.比较系统地研究了NK细胞功能活性与HCV感染及治疗后转归的关系。 2.对丙肝患者体内外NK细胞功能的对比研究有助于进一步认识NK细胞功能与HCV感染的关系。 3.动态监测丙肝患者抗病毒治疗过程中NK细胞功能的变化,以期预测患者对治疗的应答及治疗后的转归。本课题研究的意义 1.研究结果显示NK细胞功能对HCV感染后转归及抗病毒治疗效果均有直接影响,有助于我们更好地认识丙型肝炎的发病机制。 2.研究结果对于探索难治性丙肝的发生机制具有一定意义。
【图文】：

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图 1-1.一例慢性丙肝患者 PBMC 中 NK 细胞及其亚型流式检测图。 A.在 PBMC中以淋巴细胞为门; B.CD3与CD56双标进一步区分出CD3-CD56+NK 细胞; C. 峰度图显示 NK 细胞亚型 CD56dim及 CD56bright细胞

亚型,NK细胞,细胞,外周血

图 1-1.一例慢性丙肝患者 PBMC 中 NK 细胞及其亚型流式检测图。 A.在 PBMC中以淋巴细胞为门; B.CD3与CD56双标进一步区分出CD3-CD56+NK 细胞; C. 峰度图显示 NK 细胞亚型 CD56dim及 CD56bright细胞
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R512.63

【参考文献】