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细胞凋亡在应激状态下大鼠胃粘膜损伤修复过程中的作用及机制

发布时间:2020-04-01 22:55
【摘要】:应激性溃疡(SU)是严重身心应激的常见并发症。病理研究显示:SU常 表现为表浅但广泛的糜烂。应激因素持续存在时,病情常呈进行性力重;如及 时解除应激因素,粘膜病变可逐渐恢复至正常状态,而无疤痕形成等结构改变。 这对传纺观念认为的应激因素作用于胃粘膜造成细胞被动降解、坏死,进而形 成溃疡的理论提出挑战。研究发现,生理、病理状态下,还存在一种与被动坏 死不同的、由基因调控、耗能的主动死亡过程,该过程中形成的凋亡小体,为 临近细胞吞噬,不伴有炎症反应。正常胃粘膜细胞存在凋亡,它与细胞增殖共 同调节着胃粘膜结构和功能的稳态。进一步研究在朋Bcl-2/Bax,Fas/Fas-L基因 的表达与凋亡的发生关系密切。应激状态下,大鼠胃粘膜细胞的死亡形式及其 发生机制,目前仍不明确。在胃粘膜遭受到应激性损伤时,胃粘膜细胞相互之 间通过局部的信息传递所做出的快速、应激性反应,可能是维护细胞功能的重 要因素。NO是一种可在细胞间进行快速、广泛信息交换的小分子化合物, 能通过不同途径对细胞凋亡迸行精细调节。此外,细胞间信息传递还可通过细 胞膜上的特殊区城-细胞间隙连接来完成。结构连接蛋白43(CX43)是主要的 细胞间隙连接蛋白之—。应激性溃疡发生发展过程中,这些与信息传递有关的 因子的表达变化以及与胃粘膜细胞改变的关系,尚未见报道。对其机制的研究, 就是对其防治提供更有力的理论依据,目制临床常用防治消化系溃疡的药物对 应激牲溃疡的防治疗效以及胃粘膜细胞完整性的维护作用如何,不甚明确。 本课题分四部分,研究应激性溃疡发生发展过程中大鼠胃粘膜的形态 学、生化改变及其调控机制。 一、应激性溃疡模型的制备 本实验参考Brodie的方法制备大鼠水浸-束缚应激(WRS)溃疡模型; 观察WRS 2h、3.5h、WRS结束后2h、5h、8h、12h、24h,树间点胃粘膜损 伤情况,按Guth标准评估胃粘膜损伤溃疡指数(UI);并于光镜下观察组织病 理学改变。结果:对照组大鼠胄粘膜未见损伤性政变,光镜下可见表层上皮结 构完整;WRS2h大鼠胃粘膜充血,腺胃部有散在点状出血点,镜下可见粘膜层 充血、水肿,少量上皮细胞脱落WRS 3.5h~WRS结束后2h,大鼠胃粘膜面 附有大量血痂,腺胃部弥漫点线状出血灶,UI达最高值(P0.01),镜下可见 粘膜表层上皮细胞受损、雌,中断,腺体结构郊L,其间有大量红 细胞聚桌碱贿的呈火山口状,有的深达肌层;WRS结束后扣-l出腕、 出血…少,UI逐渐下阵…胃粘膜上皮结构逐浙腹,粘膜充血、 水肿咸镇至WRS结肪24h,粘膜面仅残留少量出血点,胃粘膜形态结构基 本阿羹u常M。结么bWRS可成功命限应激囹贵疡模型。应激源作用仇 体时,胃粘膜病变是一个时间胸性进展、加重的脆但当应硼去椭受 损的胃*占胭给乡沟酗青咖叶自我陕复的脆 二、应淤 中胃粘膜细胞死亡形式和增殖功能的检测 guw态学角度研究 SU Mud中胃3isnlgmBW.uxmp式 及书轮直功能的变化。绷原位才历林林己(TUNEL)法描砚IJ WRS jkkstg不同时 间点细胞调亡的发生;于透射电铭oWM到淘胞形态的变0驾 伽…ABC 法原仁杉觎不同时间点PCNA蛋白的表忒结袅1、棉大鼠胃粘膜上皮散在 TUNEb细哦LWRSZhTUNEDjatHEax,rsRgR明显增引Pd.of);WRS3.sh- 删结辐o阳性细胞数量达躲删3.o-删后D,,代表细腔杯死的 浅染 多。WRS后shng时间涨IUNEbfatB8arffiti&. 少,仁逐W24 仍高于正常水平(Pd.05);2、淑…姑g粘膜细胞形兹狈IJ,核 形赃。而发生凋亡的蛐,有账染色体发生蹦,在核膜周边聚集彤挪月 椰;有的染色体发生固缩,娜栅,核膜表面凹凸不平;有的核发生破裂, 在细胞浆内矾空艄多;有的g叫夺形湘亡,1体。3、正常胃腆蝈PCNA 主要在胃腺颈部靠近肾]、…中等阳性表屯W卫Z出、3.扣至WRS结束后出 PCNA…少(P<0.olX WRS结束后sh表达逐渐恢瓦 WRS8folZh表达达昨明显高于和照组O卅.of X至W24表达基本恢复 至正常水平0川.05)。结蚀1、应触胃粘膜细赅调亡明显增加,增殖能力下 降,它们之间的失街是溃痞发生的重要原因;2、随着应激程度的撒民凋潍 晚期阶段呈现坏死贱些特征3、在应激住损伤恢复的早期阶段,大量细胞凋 亡跳哈可sbo动细脚驹眺必翻附;4、凋亡细胞形劫崎9+4队 三、应逝性溃疡发虹M出准+细胞凋亡发纺喇獭附 (一)凋饰怂困FbdFb+L、kH阻吠私盼娜 本实验主要探讨应激性溃疡发生发展过程中,凋材目舷困BcM、 F一硼…娜一的关系。用原贱妹淑U WRS结束 M根胃3A5nssRFaS、Ft、BcLInRNA的表达,免痰绸附幼知IJBctw 蛋白的表忒瞅l、正常对照组FaS、F旺几1llttro.ra无明显表达,Ft InRNA 3 在WRS3.sh至WRS结垢sh Al6gKAsedMtl出颐阳性-中等阳性表达,但 组间表达无明趾异,WRS后l1K失。E妇InRNA在WRS结束后 sh-sh fohMk&ffe&efl出贼阳性表达,WRS跄…肖丸2、破胃 粘膜组织BclAIAde白主要在胃脚呈中等阳性表达,Bax蛋白主?
【学位授予单位】:第二军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R573.1

【参考文献】

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本文编号:2611070

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