【摘要】： 第一部分大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及其鉴定 目的分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞;并通过流式细胞仪技术对其进行鉴定。 方法采用全骨髓细胞贴壁培养筛选法分离纯化大鼠MSCs。分析培养过程中细胞出现的分化表型,判断是否为MSCs。 结果大鼠MSCs呈梭形,漩涡状方式生长,应用流式细胞技术检测MSCs表型:CD90.1高表达(99.2%),CD29高表达(98.9%),CD34低表达(0.5%),CD45低表达(0.9%)。可推测培养的细胞为MSCs。 结论采用全骨髓贴壁筛选法可以成功分离培养出高纯度大鼠MSC。 第二部分骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肝功能衰竭 目的采用MSC尾静脉移植治疗肝衰竭大鼠,并且与模型对照组及正常对照组进行比较,观察各组大鼠的肝功能、生存率、MSCs的归巢情况、肝组织病理改善情况、TNF-α水平。 方法将按第一部分方法培养出的大鼠MSCs用DAPI进行标记;采用CCL4灌胃的方法制作大鼠暴发性肝功能衰竭模型,分为实验组和模型对照组,空白对照组大鼠灌服生理盐水;将标记的细胞经尾静脉移植入实验组和正常对照组,模型对照组尾静脉注射等量的生理盐水;实验组与模型对照组进行比较,持续观察并记录2组大鼠一般状况、生存率等情况,分别于术后7d、14d处死两组大鼠,检测肝功能及肝脏病理变化,ELISA法检测TNF-α水平;冰冻切片后荧光显微镜下观察MSCs归巢至肝脏的情况,并与正常对照组比较。 结果DAPI可成功标记MSCs,细胞标记效率达98%;造模后大鼠24小时内逐渐进入肝衰竭状态,表现为拒食,活动明显减少,萎靡、嗜睡或逐渐发展为昏迷状态,对外界刺激反应较迟钝或至无反应,全身毛蓬松,尿失禁,尿色深黄,便溏,解剖发现中毒性鼓肠,皮下或粘膜下有出血点;生化检查发现肝功能严重损害,组织学检查显示肝细胞大片坏死、大量炎性细胞浸润;从移植术后3d开始,实验组存活大鼠一般情况比模型对照组好转更加明显,移植术后7d时,实验组与模型对照组比较,ALT指标、生存率、TNF-α水平均具有统计学差异(P0.05),病理切片炎症改善情况实验组更为明显;移植术后14d时实验组与模型对照组比较,肝功能指标、生存率、TNF-α水平均具有统计学差异(P0.05),病理切片炎症改善情况实验组更为明显;移植术后7d及14d,实验组MSC归巢细胞逐渐增多,空白对照组只观察到很少量归巢细胞。 结论骨髓间充质干细胞(MSC)经尾静脉同种异体移植,可以归巢到肝衰竭大鼠肝脏,能够促进急性肝衰竭大鼠肝功能的恢复,减轻肝脏组织炎症坏死和免疫状况,促进肝脏组织修复,对急性肝功能衰竭具有明显的治疗作用。
【图文】：
无菌操作取胫骨和股骨
大鼠全骨髓细胞悬液（×200）
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.3
【参考文献】
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2614105
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