肝衰竭患者血浆抑制HepG2细胞生长和增殖的研究

发布时间：2020-04-05 12:15

【摘要】： 背景和目的：越来越多的研究表明肝再生障碍是肝衰竭患者死亡的一个主要原因,但目前国内外对肝衰竭患者肝再生障碍的机制并不清楚。本研究通过体外实验,探讨肝衰竭患者血浆对HepG2细胞生长及增殖的影响,并进一步探讨其对HepG2细胞内细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin-dependent kinase 4, CDK4)表达的影响,初步了解肝衰竭患者肝再生障碍的原因及机制。方法：(1)血浆置换时收集肝衰竭患者血浆、肝素抗凝；(2)应用MTT法检测50%肝衰竭患者血浆对HepG2细胞生长和增殖作用,并与正常对照血浆及小牛血清做对照；(3)分别使用5ng/ml表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF), 10ng/mlEGF, 20ng/mlEGF刺激50%肝衰竭患者血浆培养的HepG2细胞,并观察细胞生长及增殖情况；(4)采用Hoechst染色法观察肝衰竭患者血浆对HepG2细胞凋亡的诱导；(5)采用Western-blotting(WB)技术检测肝衰竭患者血浆对HepG2细胞内Cyclin D1、CDK4蛋白表达的影响。结果：(1)MTT比色法结果表明,与正常对照血浆比较,肝衰竭患者血浆在体外对HepG2细胞生长及增殖有明显的抑制作用,在作用12h后,有统计学意义(P0.05)，且这种抑制作用呈现时间依赖性；(2)EGF对正常对照组HepG2细胞的生长及增殖有明显促进作用,但仅大剂量EGF对肝衰竭组HepG2细胞生长和增殖有一过性刺激作用。与EGF刺激正常对照组比较,肝衰竭组各时间点细胞生长与增殖仍受到明显抑制。(3)形态学观察：Hoechst凋亡染色结果表明,肝衰竭患者血浆作用于HepG2细胞后,细胞凋亡率无明显增加(P0.05)；(4)WB结果显示,随着作用时间的延长,肝衰竭患者血浆抑制HepG2细胞内Cyclin D1、CDK4的表达。结论：肝衰竭患者血浆对HepG2细胞生长及增殖具有较强的抑制作用,大剂量EGF对肝衰竭患者血浆培养的HepG2细胞增殖虽有一过性刺激作用,但并不能逆转其抑制作用；肝衰竭患者血浆抑制HepG2细胞生长和增殖的机制可能与其抑制细胞内Cyclin D1、CDK4的表达有关。
【图文】：

2.EGF不能逆转肝衰竭患者血浆对HePGZ细胞生长和增殖的抑制作用用sng/ml， 1on留ml，Zong/ml三个不同浓度EGF分别刺激正常对照组细胞和肝衰竭组细胞。正常对照组细胞在不同时间段的吸光值(OD值)见表4.1，图2.1;肝衰竭组细胞不同时间段的吸光值(OD值)见表4.2，，图2.2。结果发现:不同浓度EGF对正常对照组HePGZ细胞生长及增殖均有刺激作用，其中以20ng/ml浓度EGF对 HepGZ细胞的作用最强，在24h时，Zong/ml浓度组与sng/ml，long/ml浓度组有显著差异(P<o.ol)，但72h时，3个浓度EGF组无统计学意义(P>0.05)。然而

表4.2EGF对肝衰竭组HepGZ细胞生长和增殖的诱导(x幻)Table4.2InduetionofgrowthandProliferationofHePG2cellsbyEGFinthePreseneeofPlasmafromPatieniswithliverfailure(x劫)6h12h24h48h72hsng/ml2.03月〕.3196士0.241.89州〕.301.78切.18#1.71切.1710ng/ml2.07士0.161.91士0.191.86均.131.89切.091.85士0.3720ng/ml1.99均.151.98切.231.99士0.112.01均.121.81切.18注:#与Zong/ml组比较尸<0.05Note:#P<0.05，eomParedwithgrouptreatedwith20ng/mlEGF
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R575.3

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 许静;李丽;彭桂清;张华锋;;抗结核药致急性暴发性肝衰竭1例[J];中国医院药学杂志;2011年10期

2 黄明寿;陈郁梅;陈穗;;肝衰竭纤维化指标的动态观察和预后评估[J];中国现代医生;2011年18期

3 毛谅;仇毓东;朱新华;刘浩;丁义涛;;骨髓间充质干细胞输注治疗大鼠小体积肝移植术后肝衰竭[J];器官移植;2011年04期

4 蔡尚原;张长青;付敏;袁翠云;任继秀;;大剂量HBsAb阳性血浆置换治疗肝衰竭临床研究[J];医药论坛杂志;2011年14期

5 王开利;徐长江;金晶;高登莲;邢汉前;颜丽;赵军;;氨酚伪麻美芬片Ⅱ/氨麻苯美片过量致肝衰竭[J];药物不良反应杂志;2011年03期

6 王耀辉;丁焕平;王q湘

本文编号：2615003