炎症干扰细胞内胆固醇外排导致肝脏脂质异常积聚的分子机制

发布时间：2020-04-07 23:43

【摘要】：目的:采用皮下注射酪蛋白(Casein)诱导C57BL/6J小鼠体内产生慢性低丰度系统性炎症,研究在炎症状态下,胆固醇代谢紊乱导致肝组织损害及其相关分子机制。方法:选取24只8周龄雄性C57 BL/6J小鼠,随机分为普通饮食组(对照组,NCD)、炎症组(NCD+Casein)、高脂组(HFD)、高脂+炎症组(HFD+Casein),每组6只。正常饮食组给予普通饲料喂养,高脂饮食组给予高脂饲料喂养(含15%脂肪, 1.25%胆固醇, 0.5%胆酸盐)。炎症刺激组予隔天皮下注射0.5 ml 10%酪蛋白溶液,非炎症刺激组予隔天皮下注射0.5 ml生理盐水,18周后处死小鼠,收集血清、肝脏、胆囊、小肠组织。采用ELISA法检测血清中炎症指标白介素-6(IL-6)、血清淀粉样蛋白(SAA)、肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度。结果:与对照组相比,给予炎症刺激的两组小鼠血清中IL-6、SAA、TNFα的浓度水平显著升高,差异具有统计学意义,而单纯高脂组炎症指标水平较对照组相比无明显差异。结论:隔日皮下注射酪蛋白18周,可诱导C57BL/6J小鼠体内产生慢性低丰度系统性炎症,本实验动物模型建立成功。目的:观察慢性低丰度系统性炎症状态下,C57BL/6J小鼠血清、肝脏、胆囊、小肠及HepG2细胞中脂质含量水平及胆固醇外排相关指标的变化情况,探讨炎症是否加重脂质诱导的肝损害。方法:将HepG2细胞分为以下4组:对照组(Control)、炎症组(TNFα)、高脂组(LDL)、高脂+炎症组(LDL+ TNFα)。用HE染色及油红O染色观察小鼠肝脏及HepG2细胞形态及脂质沉积情况。用化学酶促-比色法测定小鼠肝脏及HepG2细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量。用酶法测定小鼠血清TC、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平。用3[H]标记胆固醇-液体闪烁计数法检测HepG2细胞胆固醇外流量。用磷钼酸比色法检测小鼠肝脏、胆囊及近端小肠中胆汁酸水平。结果:肝组织HE染色显示,与对照组相比,炎症组与高脂组的肝脏组织结构紊乱,肝细胞内有明显脂滴积聚和少量空泡形成,而高脂+炎症组可见肝细胞大量空泡样变性及炎症细胞浸润。肝组织和HepG2细胞油红O染色显示,与对照组相比其余三组红染颗粒增多,且以高脂+炎症组最为明显。肝组织和HepG2细胞内胆固醇检测结果显示,与对照组相比其余三组TC、FC、CE含量均增加,且以高脂+炎症组最为显著(P0.05)。小鼠血清TC、LDL、HDL检测结果显示,高脂饮食增加了小鼠血清中三者的浓度,而无论给予正常饮食或高脂饮食,炎症刺激均能降低三者血清中的浓度(P0.05)。细胞内胆固醇外流测定结果显示,与对照组相比,高脂组胆固醇外流量增加而炎症组降低,高脂+炎症组较高脂组外流量明显减少(P0.05)。小鼠总胆汁酸水平检测结果显示,高脂组肝脏、胆囊及近端小肠中总胆汁酸水平较对照组增高,而高脂+炎症组与单纯高脂组相比,其水平降低(P0.05)。结论:慢性低丰度系统性炎症可引起C57BL/6J小鼠肝脏及HepG2细胞内脂质异常积聚,干扰了胆固醇外流及胆汁酸合成过程。目的:探讨炎症通过干扰过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)、肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、胆固醇7α羟化酶1(CYP7A1)介导的胆固醇外排致肝内脂质积聚的分子机制。方法:在前面两个部分所建立的小鼠及细胞模型上,采用实时定量PCR(Real-Time PCR)法和蛋白免疫印迹(Western Blotting)法分别检测小鼠肝脏和HepG2细胞中PPARα、PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1等基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:Real-Time PCR结果表明,无论在小鼠肝脏或HepG2细胞中,与对照组相比,高脂组中PPARα、PPARγ、LXRα、ABCA1、CYP7A1的mRNA表达显著上调,炎症组表达则下调,而高脂+炎症组中上述各基因的mRNA表达水平较高脂组明显下降(P0.05)。Western Blotting结果显示蛋白表达情况与基因相符。结论:炎症应激可以通过下调肝脏中PPARα/PPARγ-LXRα-ABCA1/CYP7A1的表达,抑制胆固醇的外流和胆汁酸合成,加重脂质在肝脏的沉积从而引起肝损害。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.5

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