基于代谢组学“抗生素相关性腹泻”与“脾阳虚证”相关性的实验研究

发布时间：2020-04-08 04:26

【摘要】：抗生素相关性腹泻在中医学归属于“泄泻”范畴,泄泻以脾虚为本。脾为后天之本,气血生化之源,气机升降之枢纽,脾具有运化、升清、统血之功能。而脾阳是脾气中阳的活力部分,借其温煦、动力、向上、向外等作用能维持脾脏运化濡养之功能、推动脾脏的正常运行,脾阳虚衰则运化水谷无力、不化精微反成湿浊,清阳不升,湿浊下沉而发生泄泻。长期大量不合理使用抗生素,致药毒蓄积,耗伤脾胃之气,脾阳易损,脾运无权,水谷不化,气机不利,升降失调,清气不升,浊气不降,内生湿浊,从而导致抗生素相关性腹泻发生。诸多现代医家认为“脾阳虚”与AAD发生关系密切,并以温中健脾立法取得良好疗效。但关于它们之间的内在联系缺乏相应的数据支持。因此,本研究基于代谢组学的研究方法,构建运用抗生素致AAD模型与苦寒药物致脾阳虚证模型,运用超高液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF)检测SD大鼠的血清,筛选出不同模型的内源性标志物,进而从代谢水平上为探究AAD与脾阳虚证相关性及内在联系提供相关依据与数据支持。目的通过观察抗生素相关腹泻及脾阳虚证两组大鼠的一般情况及大便变化,从表观特征上初步探讨两组大鼠的抗生素相关性腹泻与脾阳虚证可能存在的关系;运用代谢组学的方法筛选出两组动物模型的内源性标志物,进而从代谢水平上为探究AAD与脾阳虚证相关性及内在联系提供相关依据。方法本研究将30只SD大鼠随机分为3组,分别为空白对照组、抗生素相关性腹泻组、脾阳虚组,每组10只;应用文献提供的造模方法分别运用生理盐水、克林霉素、大黄进行造模;造模成功后采集SD大鼠的腹主动脉血,运用超高液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF)检测SD大鼠的血清;对一般情况数据运用SPSS20.0软件分析;对代谢组学数据,采用markerlynx软件对数据分析、统计,确证内源性差异物。运用MetaboAnalyst 3.0分析确定潜在生物标记物代谢通路。结果1.体重变化情况:造模第10天,AAD组与空白对照组大鼠体重相比,p=0.021有统计学意义;(大黄造模)脾阳虚组与空白对照组大鼠体重相比,p=0.002有统计学意义;AAD组与(大黄造模)脾阳虚组大鼠体重相比,p=0.229无明显统计学差异。2.2小时粪便总重变化情况:造模第10天,AAD组与空白对照组大鼠2小时粪便总重相比,p=0.031有统计学意义;(大黄造模)脾阳虚组与空白对照组、AAD组相比,p0.05均无明显统计学差异。3.代谢组学分析结果:AAD组与空白对照组相比鉴定出了22个生物标志物,(大黄造模)脾阳虚组与空白对照组相比鉴定出了21个生物标志物。从AAD组和(大黄造模)脾阳虚组中共筛选出7个相同的内源性生物标志物:0-磷酸高丝氨酸、戊二酸甘氨酸、十二烷酰肉碱、VPGPR肠抑素、DG(14:0/14:0/0:0)、D胆素、PI(16:0/18:2(9Z,12Z))。4.代谢通路:AAD相关的代谢通路中影响因子较高的通路是:Valine,leucine and isoleucine degradation(缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸降解);(大黄造模)脾阳虚证相关的代谢通路中影响因子较高的通路是:Pentose and glucuronate interconversions(戊糖和葡糖醛酸盐相互转化)。结论1.从造模成功后的一般情况、体重变化及大便情况等表观特征及中医证候上表明AAD与(大黄造模)脾阳虚证存在相关性。2.从代谢组学血清学分析结果表明AAD与(大黄造模)脾阳虚证存在部分相同的内源性标志物,在代谢组学层面存在一定的相关性。3.代谢组学分析结果表明AAD与(大黄造模)脾阳虚证内源性标志物不完全一样,与发生AAD和脾阳虚证时它们各自相关的代谢途径差异有关。4.代谢通路结果提示AAD与氨基酸代谢相关,(大黄造模)脾阳虚证与糖代谢相关。
【图文】：

基于代谢组学“抗生素相关性腹泻”与“脾阳虚证”相关性的实验研宄．邋１邋一般情况观察逡逑造模前以及造模期每天称量１次体重，观察摄食量、饮水量，并观变化、尾部肛口干净程度等。逡逑．逦２腹泻指标观察逡逑（１）粪便形态分级逡逑０级：褐、成形、硬粪便；１级：黄或褐、成形、软粪便；２级：黄或成形粪便。如图１示：逡逑

图１大鼠血清ＵＰＬＣ－Ｑ－ＴＯＦ质谱图逡逑３各组多元数据分析结果逡逑ＳＤ大鼠血清的正交偏最小二乘法－判别分析（ＯＰＬＳ－ＤＡ邋）得分图（图３、４）显逡逑示，正常对照组与ＡＡＤ组大鼠分析结果有较明显的区别，其中３个主成分在正离子模逡逑式下得出，Ｒ２Ｘ＝０．邋３３４６，邋Ｒ２Ｙ＝０．９７８８，邋Ｑ２＝０．８１７３，邋３个主成分在负离子模式下得出，逡逑Ｒ２Ｘ邋＝０．４１１２，Ｒ２Ｙ邋＝０．９７６８，邋Ｑ２＝０．邋８１９６。正常对照组与脾阳虚组大鼠分析结果也逡逑有较明显的区别，其中３个主成分在正离子模式下得出，，Ｒ２Ｘ＝０．邋３６４９，邋Ｒ２Ｙ＝０．邋９７７３，逡逑Ｑ２＝０．邋８８４３，邋３邋个主成分在负离子模式下得出，Ｒ２Ｘ＝０．邋３５３１，Ｒ２Ｙ＝０．邋９６５９，邋Ｑ２邋＝０．８９２４。逡逑３５逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R574.62

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本文编号：2618887