HBV对细胞原癌基因、MMPs及TIMPs的影响

发布时间：2020-04-15 06:45

【摘要】： HBV(Hepatitis B virus)感染是肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)高发的最主要原因。研究HBV致病机制的重要途径就是建立方便有效的HBV感染模型。我们前期的研究建立了能使HBV长期稳定表达抗原并复制的HBV HepG2肝癌细胞株RHBV-3,同时获得了空载体细胞株RepSal-1。RepSal-1、REP-HBV细胞株的成功建立为我们研究HBV复制在整体水平对细胞的影响提供了途径。 细胞原癌基因(proto-oncogene)与细胞正常功能有关,当发生突变或异常活化时可引起肿瘤发生。目前的研究认为HBV可能通过DNA整合激活原癌基因(顺式活化作用)或其编码的病毒产物反式活化细胞基因发挥致癌作用。 另外,基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)与恶性肿瘤侵袭转移的关系是研究的热点。有报道发现在整合有HBV DNA的Hep3B细胞及感染HBV的肝癌细胞中MMP9的表达增高,而对TIMPs的影响尚未见报道。 因此本研究拟通过对RepSal-1、RHBV-3细胞株中原癌基因、MMPs及TIMPs基因转录表达及酶活性的分析,初步了解HBV在整体水平上对癌相关基因的影响,进而探讨HBV致肝癌的机制及其与肝癌细胞侵袭转移的关系。 本研究第一部分通过设计基因特异性引物,应用实时定量PCR(Real-timeQuantitative Polymerase Chain Reaction,RQ-PCR)初步分析HBV对HepG2细胞原癌基因Ras、Jun、Myc、Fos及MMP2、9和TIMP1-4基因转录的影响,结果表明HBV复制促进Ras、Jun、Myc、MMP2、9、TIMP1、3基因转录,抑制TIMP4基因转录。对TIMP2无影响。 本研究第二部分通过明胶酶谱检测MMP2、9酶活性。结果显示,HBV能增强MMP2、MMP9的表达和激活。反相明胶酶谱法检测结果显示,HBV增强细胞中TIMP1、TIMP3表达,抑制TIMP4表达。 总之,本研究结果表明HBV可影响原癌基因、MMPs、TIMPs的基因转录,这与HBV相关的HCC的发生、发展密切相关。
【图文】：

法进行计算:待侧基因△Ct=平均待测基因△Ct‘平均GC拼待测基因△Ct实验组一待测基因△Ct对照组，，对照组和数关系用2一阴绷MCt来计算[’“”2]。根据标化后的表达量采用Student’St检验进行统计学分析。胞株HBV分泌抗原表达情况细胞上清液，ELISA检测HBV特异抗原的表达情况均能表达HBsAg和HBeAg(见图1.1)，且随着细胞培HBsAg和HBeAg含量逐渐增高。

TRIZOL提取RePSal一1和RHBV-3细胞株总RNA，以紫外分光光度计检测OD26。、OD28。及比值，以确定RNA的浓度及纯度，将其浓度调至0.5卜留川。OD26夕ODZ，。t匕值为 1.81，1.2%凝胶电泳成像(图1.2)。饰M妞E巴VJ月坤-今龙翔甲1侧抑十-55图1.2细胞抽提RNA凝胶电泳分析M:分子量Marker;sal:Repsal一l细胞;HBv:刃侣V-3细胞2、预实验PcR扩增产物的凝胶电泳分析(见图1.3)bP20001000750500250100 M12345678 91011图1.3预实验PCR扩增产物凝胶电泳分析M:DNA分子量 markerDLZO00;l:JUN;2:Mve;3:Ras;4:Fos5:MMPZ6:MMPg:7:TIMPI;8:TIMPZ;9:TIMP3;10:TIMP4:1]:GAPDH3、Real一 timePCR分析采用实时定量PCR对所选的10个基因及内参照基因GAPDH进行mRNA相对定量检测，绘制扩增曲线(见图1.4)、融解曲线(见图1.5)、计算Ct值(见表1.2)。检测结果表明，扩增体系良好。融解曲线显示，扩增产物特异。各检测基因mRNA表达水平根据管家基因GAPDH的均值进行标化，比较标化后pREP一HBV细胞与
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R512.62;R735.7

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本文编号：2628259