肝纤维化单个核细胞蛋白质组初步研究

发布时间：2020-04-25 01:30

【摘要】：目的：世界卫生组织报道全球约20亿人感染过HBV,慢性患者可能发展为肝纤维化、肝硬化或肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)；我国慢性乙肝导致的肝纤维化较为多见。及时准确判断肝纤维化发展程度,可为病情诊断和临床治疗提供重要帮助。目前,肝脏穿刺活检病理检查仍是诊断慢性肝病肝纤维化、肝硬化的金标准,但由于其具有创伤性,患者易产生不适感及发生潜在并发症,更安全便捷的检测方法有待进一步研究。随着蛋白质组学技术的发展,该学科在发现疾病特异生物标志物的应用中显现出独特的优势；而PBMC是机体重要的免疫细胞,与很多疾病的发生发展过程相关。因此,我们设计通过蛋白质组学路线来研究肝纤维化不同分期患者PBMC蛋白质表达差异,来发现PBMC中肝纤维化发展可能的生物标志物,为肝纤维化的诊断、治疗及预后探索新的研究方向。方法: 收集2009年3月至2011年2月由复旦附属上海市公共卫生临床中心肝炎科就诊的慢性乙型肝炎肝纤维化病人,按肝活检诊断分为S1期、S4期各24例,共48例,患者年龄34-63岁,平均46.54±8.15岁,各组之间年龄(P=-0.780)无统计学差异；用淋巴细胞分离液来分离PBMC,提取全细胞蛋白质,采用Bradford法进行蛋白质浓度测定; 蛋白质的二维凝胶电泳对蛋白质进行分离；通过ImageMaster2D Platinum6.0软件对所得胶块图像进行分析。所得差异蛋白质点经酶解后,通过纳升级反向液相色谱串联电喷雾离子阱质谱进行鉴定。对比数据库,明确鉴定所得蛋白质的信息,查阅文献了解差异蛋白质的生物学意义。结果：蛋白质点得到较好分离,S1组和S4组双向电泳图中分别检测到1057±134,1052±130个蛋白质点。S1组和S4组的平均匹配点数和匹配率分别为727±161(61.5%)和716±139(58.1%)。获得12个差异表达的蛋白质点,在肝纤维化S4期中,8个蛋白质点上调,4个蛋白质点下调；12个差异表达的蛋白质点均得到准确鉴定,这些差异蛋白质包括与细胞运动、与细胞粘附以及细胞转录等相关的蛋白质。查阅文献,发现PBMC中差异蛋白质膜组织伸展刺突蛋白(Moesin)、胶转蛋白(Transgelin-2)、热休克蛋白(HSP70)等蛋白质可能与肝纤维化分期相关,可以作为肝纤维化发生机制的一个探索方向。结论：我们采用蛋白质组技术从PBMC中筛选和鉴定一些差异蛋白质,这些蛋白质可能与肝纤维化的发展相关,它们可能对肝纤维化进展的研究有意义。蛋白质组学路线来研究PBMC可以用于寻找和发现肝纤维化分期相关生物标志物。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.2

【参考文献】