乙肝纤维化分期相关血浆标志物的定量蛋白质组研究

发布时间：2020-05-08 17:00

【摘要】： 肝纤维化发生的病因很多，我国多由HBV病毒感染导致，而在欧美等国则以酒精所致者多见。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，每年大约有100万人死于HBV感染导致的肝衰竭、肝硬化以及肝癌。我国是病毒性肝炎高发区，仅乙型肝炎病毒(HBV)携带者就达1.2亿，，其中慢性乙型肝炎患者有3，000万以上，约25％慢性乙肝患者最终将发展为肝硬化(Liver/hepatic cirrhosis，LC)，甚至肝癌。假如肝纤维化病人得不到及时有效地治疗，就有可能逐渐转变为肝硬化，甚至进一步发展为肝癌，每年肝硬化患者中肝癌的发生率大约为3％～10％。肝纤维化既是一种代偿修复反应，又是肝损伤的促进因素，表现为肝内结缔组织过度增生与沉积。肝纤维化是一个慢性渐进的过程，准确诊断肝纤维化进程，可为病情诊断和临床治疗提供帮助。目前，肝穿刺活检病理检查是诊断慢性肝病肝纤维化、肝硬化的金标准，但其具有创伤性，患者易产生不适感及潜在并发症；病人不愿意接受多次肝穿跟踪监控病情及疗效等，所以常规肝穿刺活检在实际操作中具有相当难度。理想的诊断指标应具有高度敏感度和特异度，且简便易行，患者易于接受，故寻求无创性诊断肝纤维化的有效方法目前是临床医生关注的热点问题之一。 由于人体血浆(血清)包含了几乎涉及人体所有器官或者组织相关的丰富信息，并能反映几乎所有疾病状态信息，再加上它具有取材方便快捷低创等特点，是最为理想的临床治疗和诊断的样本材料。截至目前，在血浆中已经发现了与肝纤维化以及硬化相关的一些蛋白标志物，但由于它们在灵敏性和特异性等方面，还不能满足临床的需要，仍需借助肝穿进行病理检查。因此，还需要进一步发掘具有临床诊断或者治疗意义的血浆蛋白标志物。近年来，随着定量蛋白质组学技术的发展，整体系统地从蛋白质组水平分析血浆中与疾病及生理相关的蛋白标志物成为现实。 本实验以目前的肝纤维化分期检测“黄金标准”-肝穿病理检测结果为标准，利用定量蛋白质组技术手段，从血浆中挖掘与病理检测结果相一致的蛋白(群)，以期发现与肝纤维化分期相关的新蛋白(蛋白组合)，提高肝纤维化分期检测的精确性和灵敏度，服务于纤维化发生机制研究和临床实践。 乙酰化定量标记技术是针对肽段N末端进行氘(氢)标记的定量蛋白质组技术手段，具有标记完全、定量准确、操作简单、价格便宜等特点。本研究利用此技术，针对基于病理检查的乙肝纤维化一期(S1)、二期(S2)、三期(S3)、四期(S4)以及健康对照(S0)五组血浆样本(各组包含10例左右样本)进行差异对比分析，最终共得到了有定量信息的血浆蛋白1，063个，其中在肝脏纤维化不同时期具有显著差异(Ratio＞1.5，P＜0.05)的血浆蛋白246个，形成了与肝纤维化分级相关的候选蛋白(群)。针对差异蛋白定量Ratio值(组内蛋白与内标比值)进行聚类分析的结果显示，总体差异蛋白(群)被聚为五大类别，在五组样本(S0-S4)间分别呈现逐渐上升、逐渐下降、先上升后下降、先下降后上升以及上升下降波动等趋势。五组间的聚类结果显示，无纤维化以及纤维化前期(S0，S1，S2)被聚为一类，纤维化后期(S3，S4)被聚为一类，提示差异蛋白Ratio值在纤维化前后和后期呈现明显区别。其聚类分布特点与纤维化发展进程与实际病理特点相吻合。利用基于文献数据支持的Ingenituy通路分析软件对246个差异蛋白进行分析，结果表明，这些鉴定的差异蛋白大部分被定位在了八个主要的信号通路网络(血管系统发育网络图／脂类代谢网络图／细胞生长分化通路网络／免疫及淋巴系统调控网络／细胞信号传导与组织发育网络／氨基酸代谢与蛋白修饰网络／转录调控网络／细胞分裂网络)，它们又交叉状形成一个整体相互作用网络图。部分蛋白的western验证结果表明，质谱定量信息是准确的，而且，初步的验证结果也显示，a1酸性蛋白、纤维结合蛋白、细胞分裂周期蛋白23等在纤维化分期诊断方面，具有很好的标志信息，具有进一步扩大样本群深入挖掘的潜力。
【图文】：

许多不同水平的调节。目前认为，肝星状细胞cellularmatrix，ECM)的最主要的来源细胞，HSC受损时HSC被激活而转化为肌纤维母细胞，快速，脂滴、类维生素A丢失，表达Q一平滑肌肌动蛋白和多种细胞因子及受体，细胞大量增殖，合成)检测以及其它检测手段的重要的分子基础之一。胞、非实质细胞及炎症细胞等均与肝纤维化的形印atocyte，Hc)，而非实质细胞包括窦内皮细胞枯否细胞(如pfl魁rCell，“)、肝星状细胞(h印atie胞.周Disse间隙，正常时呈静止状态，不合成或仅合激

中白蛋白和免疫球蛋白去除的效果评价:l:处理removale币d即cyevaluationOfalbuminandIgGfroI:切阳tedPla，朴aZ:rudePlas们naPAGE分离了五组血浆样品，每组大致包括了10比较更加合理科学，本实验采用了内为内标，然后进行后期的分离与定量有的血浆蛋白信息，五期血浆蛋白分同蛋白在各组的表达情况(调高或者内标样品等量混合后再进行后期标记相同的条件下进行后期分析，消除由素带来的影响，使数据更加准确。50P51P52P53PS4P
【学位授予单位】：中国人民解放军军事医学科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R575.2;R512.62

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 布拉提拜·阿昝拜克;;62例病毒性急性黄疸性乙型肝炎临床分析[J];医学信息(上旬刊);2011年08期

2 李海燕;许春梅;李军琪;;白细胞介素-12受体与病毒性乙型肝炎的相关性研究进展[J];国际消化病杂志;2011年03期

3 胡翠君;;沭阳县2008年乙型肝炎疫情分析[J];中外医疗;2011年17期

4 吕洁玉;杜二球;陈永利;胡平;金全芳;张冬霞;;CD4~+CD25~+调节性T细胞在HBV宫内感染的表达及意义[J];湖北医药学院学报;2011年03期

5 马羽萍;罗改云;;中西医结合治疗乙型肝炎方法的认识和体会[J];陕西中医;2011年08期

6 吴昊澄;徐旭卿;王臻;曾蓓蓓;鲁琴宝;何凡;刘碧瑶;赵艳荣;;乙型肝炎发病趋势的GM(1,1)模型预测[J];浙江预防医学;2011年09期

7 李齐芳;邓肖英;赖海涛;;灵山县2004—2009年乙型肝炎的流行特征[J];职业与健康;2011年14期

8 宿新农;;从业人员乙型肝炎病毒感染情况调查[J];中国预防医学杂志;2011年08期

9 戚园;杨珏;葛国洪;;不同剂量重组乙型肝炎疫苗对成人免疫效果的影响[J];中国医药指南;2011年23期

10 徐浩;梁雪松;范文翰;万谟;;阿德福韦酯联合拉米夫定治疗乙型肝炎DNA阳性肝硬化疗效观察[J];现代生物医学进展;2011年12期

相关会议论文 前10条

1 叶于富;谢小军;周琳;谢海洋;余晓波;冯晓文;郑树森;;Th17/IL-17在乙型肝炎肝组织病理损伤中的机制研究[A];2009年浙江省外科学学术年会论文汇编[C];2009年

2 齐兴军;姬宝印;于洪枢;;从业人员乙型肝炎感染状况调查[A];吉林省预防医学学术座谈会论文集[C];2004年

3 殷晓轩;孙世萍;;心理疗法在乙型肝炎治疗中的地位与应用[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年

4 黄灿华;;RUNX3基因在乙型肝炎病毒诱导肿瘤发生中的作用[A];2004年中国科学院新生病毒性疾病控制学术讨论会摘要集[C];2004年

5 林寿宁;黄彬;朱永苹;;壮肝逐瘀煎治疗乙型肝炎肝纤维化60例临床观察[A];第四次全国中西医结合养生学与康复医学学术研讨会论文集[C];2004年

6 邹金生;;乙型肝炎临床治疗的思考[A];中国中西医结合学会第十六次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2004年

7 刘娅;张爱芸;袁迎春;席向红;赵经川;;性别因素在乙型肝炎及肝硬化中的作用[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年

8 郑玉清;包丽梅;;口腔科门诊乙型肝炎病人治疗过程中的护理体会[A];全国第六届口腔医院管理研讨会论文汇编[C];2000年

9 杨必金;;乙型肝炎的辨证施治[A];中国中医药学会建会20周年学术年会专辑(下)[C];1999年

10 李知玉;吴其恺;何清;唐奇远;段钢;;慢性HBV感染者血清HBeAg及HBVDNA与肝组织病理分级分期的关系[A];中华中医药学会全国第十四次肝胆病学术会议论文汇编[C];2010年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 许晓岚;我区将对乙型肝炎流行病学展开调查[N];内蒙古日报(汉);2008年

2 上海市第六人民医院教授、主任医师 潘钰卿;乙型肝炎需早治[N];上海科技报;2000年

3 上海中医药大学 胡义扬;乙型肝炎如何预防[N];上海中医药报;2004年

4 市传染病医院副主任医师 周红燕;乙型肝炎能否彻底治愈？[N];无锡日报;2005年

5 郭新会 北京佑安医院 主任医师;直面乙型肝炎[N];中国劳动保障报;2009年

6 李赛玲;朱军;乙型肝炎辨治研究[N];中国医药报;2003年

7 本报记者 张雷 实习记者 陈丽莹;乙型肝炎携带病毒≠患病[N];医药经济报;2004年

8 刘士敬 博士;乙型肝炎为何多为慢性的[N];中国医药报;2000年

9 昌吉州人民医院传染病分院副院长 主治医师 巩维进;乙肝不可怕 治疗很重要[N];昌吉日报;2009年

10 孔明云;治疗乙型肝炎经验方七则[N];中国中医药报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 李树龙;乙肝纤维化分期相关血浆标志物的定量蛋白质组研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

2 薛文达;小鼠肝核苷酸池、核酸池的特征及其与纤维化的作用关系[D];南京师范大学;2012年

3 严君;调节炎症和纤维化防治小鼠肿瘤转移[D];北京协和医学院;2009年

4 靳自学;HBV转基因小鼠肝脏纤维化的免疫学机制研究[D];中国科学技术大学;2011年

5 彭利军;影响乙型肝炎病毒感染结局的候选基因多态性研究[D];复旦大学;2011年

6 邵中军;乙型肝炎病毒宫内感染危险因素研究[D];第四军医大学;2005年

7 周世水;重组人源抗HBsAg单链抗体—干扰素γ在巴氏毕赤酵母中表达的研究[D];华南理工大学;2003年

8 潘若浪;间充质干细胞抗肝脏纤维化作用及其机制的探索研究[D];浙江大学;2011年

9 赫兢;治疗性乙型肝炎病毒DNA疫苗的基础研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年

10 郭明高;表面抗体基因在肝移植中抑制乙型肝炎病毒再感染的实验研究[D];第二军医大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 张骏飞;拉米夫定治疗乙型肝炎肝衰竭的临床观察[D];安徽医科大学;2011年

2 马颖;阿德福韦酯片治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效和安全性研究的方案设计与实施阶段小结[D];四川大学;2005年

3 陈丽英;慢性丙型肝炎患者糖尿病并发率调查及其临床特征分析[D];吉林大学;2005年

4 石少媛;人类白细胞抗原-DRB1基因多态性与山西地区家族性乙肝的相关性研究[D];山西医科大学;2010年

5 曹宏;妊娠期乙型肝炎危险因素的探讨[D];天津医科大学;2003年

6 王秀娟;干扰素联合胸腺肽α1治疗免疫耐受期乙肝病毒携带者的实验研究[D];吉林大学;2005年

7 刘晓梅;胸腺肽α1抗乙型肝炎病毒作用的研究[D];吉林大学;2006年

8 何夏婷;高校学生乙型肝炎知识—态度—行为问卷的编制、评价以及应用[D];暨南大学;2010年

9 福军亮;乙型肝炎患者CD4～+CD25～+调节性T细胞特点和肝病进展相关性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年

10 谷军生;慢性病毒性乙型肝炎急性发作后体内免疫动力学研究[D];郑州大学;2005年

本文编号：2654932