miRNA-29a在非酒精性脂肪性肝病中的表达及作用机制

发布时间：2020-05-09 12:03

【摘要】：研究背景及目的:非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指在无过量饮酒史[过去12个月每周饮用乙醇(酒精)男性210g,女性140g],未应用导致脂肪肝的药物,并排除病毒性肝炎、自身免疫性肝炎、肝豆状核变性、全胃肠外营养、乏β脂蛋白血症、先天性脂质萎缩症、乳糜泻等可以导致脂肪肝的特定疾病,由影像学或组织学确定肝脏内过多的脂肪沉积,即可诊断非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)。近年来随着表观遗传学的发展,许多研究表明,微小RNA(microRNA,miRNA)与肝病的关系密切,且miRNA-29a在脂质代谢中发挥调节作用,而非酒精性脂肪性肝病本质是脂质代谢的异常,因此探索miRNA-29a在非酒精性脂肪性肝病发病过程中的表达情况及探索其作用靶点对于揭示miRNA在非酒精性脂肪性肝病发病中的作用机制有着重要作用。本研究试图构建模拟人的脂肪肝形成过程的非酒精性脂肪性肝病动物模型,观察模型构建过程中NAFLD的病理经过,以定量PCR法检测miRNA-29a在NAFLD中的表达情况,进一步探索其在疾病发展中的生物作用。方法:选取8周龄C57BL/6小鼠共60只构建NAFLD动物模型,适应性喂养1周后,随机分为对照组和实验组各30只,实验组给予高脂饮食FF(fast food)与高果糖饮水,对照组给予普通饲料喂养,分笼喂养每笼5只编号,间隔1周测量小鼠体重,于喂养4周,8周,12周,16周,20周,24周,28周分别处死实验组和对照组各3-5只小鼠,麻醉并心尖穿刺取血0.8-1.0ml,分离血清,实验室检测ALT、AST、DBIL、TBIL、LDL、HDL、TG、TBA、GLU 等生化指标。取新鲜肝脏组织,称取肝脏湿重,并选取右叶肝组织做病理切片,行HE、油红、Masson染色,免疫组织化学测:TGF-β31,α-SMA的表达情况。从各时间节点取的等质量肝组织提取RNA,用SYBR Green Ⅰ Real Time PCR方法检测小鼠肝组织样本中目的miRNA-29a表达水平的变化情况。结果:我们成功构建C57BL/6的NAFLD动物模型,且在模型过程中第2个月起出现脂肪变,实验组与对照组相关生化指标及病理表现出现明显差异。在实验组与对照组不同时间肝脏组织定量提取miRNA-29a的分析中,实验组第2个月水平较对照组显著升高,且具有统计学差异(P0.05),在3-6个月miRAN-29a实验组水平较对照组均高,但并无显著差异。结论:FF饮食与高糖饮水可以成功构建NAFLD动物模型,2个月后出现脂肪肝表现,且随时间呈现逐渐加重趋势,并出现肝纤维化的发生与进展。miRNA-29a水平在非酒精性脂肪性肝病模型初期出现明显升高,随时间推移呈现适应性改变。
【图文】：

变化趋势,实验组,对照组,高脂肪

Ｂ勺间逡逑图１小鼠体重变化趋势逡逑从图１可见，小鼠体重在起始６Ｗ内对照组与实验组并无明显差异，这可能与小逡逑鼠初食高脂饲料，并不适应符合高脂肪的饮食有关。６Ｗ后实验组小鼠体重逐渐逡逑升高平均体重超过对照组，两组总体体重均呈上升趋势，但实验组与对照组存在逡逑统计学差异（Ｐ＜0．0５），比较结果如表１逡逑逦表１对照组与实验组各节点体重比较（ｇ）逦逡逑时间逦对照组逦实验组逦Ｐ值逡逑１逦周逦２５．００±０．５６５９逦２４．８２±０．４５９０逦０．２０５４逡逑２逦周逦２６．１５士０．６３１３逦２５．９７士０．３３６１逦０．１９８７逡逑３逦周逦２７．牡０．６８９８逦２７．１２±０．３４９０逦０．３６１１逡逑４逦周逦２８．１７±０．２５２９逦２８．１０±０．２３３６逦０．１２７７逡逑５逦周逦２８．８５±０．７３３１逦２８．６０士０．４１２６逦０．１５３６逡逑６逦周逦２９．８０±０．３７３４逦２９．５３±０．４００４逦０．０２４７逡逑７逦周逦３１．２５±０．５６８０逦３３．５８±０．３１６８逦＜０．０００１逡逑８逦周逦３１．３７士０．２８２６逦３４．８７±０．２３８８逦＜０．０００１逡逑９逦周逦３１．２５±０．５１０１逦３５．４４±０．２６１６逦＜０

对比图,对比图,对照组,实验组

图２邋ＡＬＴ实验组与对照组对比图逡逑１６逡逑
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R575.5

【参考文献】