银杏叶提取物对大鼠肝纤维化的防治作用及其机制

发布时间：2020-05-11 08:04

【摘要】：肝纤维化是一常见病，致病率和病死率高。慢性肝病如寄生虫性(血吸虫、华支睾吸虫感染)、慢性病毒性(HCV、HBV感染)、免疫性(自体免疫性肝损伤)、毒物损伤性肝病等均可导致肝纤维化的形成，进一步可发展为肝硬化甚至肝癌。肝纤维化的病理特征为肝内过量的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)沉积。到目前为止，临床尚无确实有效的治疗方式。银杏叶提取物(extract of Ginkgo biloba，EGB)由银杏树的绿叶中提取，其具有类似SOD的活性和自由基清除作用，本研究的目的是了解EGB在大鼠CCl_4所诱导肝纤维化形成和恢复过程中的作用及其可能的机制。研究分为两部分，第一部分研究EGB对大鼠CCl_4肝纤维化形成的抑制作用及其机制。将40只大鼠随机分为正常对照组(N组)、EGB正常对照组(E组)、造模组(C组)和EGB预防组(CE组)。四组大鼠分别以生理盐水、EGB200mg·kg~(-1)、生理盐水或EGB 200mg·kg~(-1)灌胃，1次·天~(-1)；同时分别以矿物油、矿物油、CCl_4+矿物油(1：1)或CCl_4+矿物油(1：1)0.15ml·只~(-1)腹腔注射，2次·周~(-1)。于第8周末处死大鼠，应用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、Alb、TP和Tbil，观察肝功能变化；肝组织HE染色、Masson染色和网状纤维染色，观察肝组织病理学变化；检测肝组织中MDA含量的变化；免疫组化方法检测肝组织αSMA蛋白表达的变化；RT-PCR法检测肝组织中MMP-13、-2、TIMP-1和TIMP-2基因表达的变化。第二部分研究EGB对大鼠肝纤维化逆转的促进作用及其机制。大鼠CCl_4腹腔注射8周后，将C组大鼠处死，经病理学检查证实为肝纤维化形成，将剩余18只大鼠随机分为2组：EGB治疗组(Y组)和自然恢复组(Z组)，分别以EGB 200mg·kg~(-1)和等体积生理盐水灌胃，1次·天~(-1)，共2周，于实验末处死大鼠，同样进行肝脏病理学研究、肝功能检测、肝组织MDA含量检测和αSMA蛋白表达的免疫组化研究及肝组织MMP-13、-2、TIMP-1和TIMP-2基因表达的研究。结果发现，C组肝纤维化形成，与N组相比较，C组大鼠肝纤维化程度明显增加(，6.18，尸0.01)，肝组织中胶原纤维和网状纤维含量明显增加(拼25.H 和27.14，P0.001)，MDA含量明显增加(片9.64，P0.001)，，aSMA蛋白阳性染色面积明显增加(t=4‘94，P0.001)，MMP一2、TIMP一l和TIMP一2基因表达明显增加(r分别为29.37，27.56，25.08，P0.001)，血清ALT、AST活性和Tbil 水平明显升高(t分别为6.82、7.14和6.06，尸0.001)，血清Alb、TP含量则明显降低(t分别为1221和1 3.79，尸0.001)。相对于C组，CE组大鼠肝功能改善(ALT:卜3 .89，AST:卜5.06;Thil:拼4.22，TP:拼n .01，Alb:片7.04，均为尸0.001)，肝纤维化程度降低(u二3.55，p0.01)，肝组织中胶原纤维和网状纤维沉积明显减少(拼9.85和18.94，P0.001)，MDA含量降低(拼3.71，P 0.005)， aSMA蛋白阳性面积明显减少(拼6.67，P0.001)，MMP一2、TIMP一l和TIMP一2 基因表达减少(t为14.58，11.29，7.52，P0001)，但CE组各指标与N组相比较仍有显著性差异(ALT:户3.27，P0.005;AST:卜2.04，Alb:拼2.59，Tbil: t=2 .50，P0.05;TP:t=4.04，P0.001;肝纤维化分级:u=3.95，P0.01;胶原纤维沉积:t=16.79，P0.001;MDA:t=6.67.P0.001;aSMA:拼3.02，P0.005; MMP一2:t= 18，72，TIMP一l:卜26.22，TIMP一2:t=13.40，P0.001):网状纤维沉积与N组相比较，无显著性差异(片1.71，P.05)。E组和N组各指标无明显差异。各组肝组织中未见MMP一13基因表达。 Z组大鼠肝纤维化程度相对于C组明显降低(u=3.28，P0.01)，肝组织中胶原纤维和网状纤维含量减少(t分别为2.99，3.23，P0.005)，MDA含量下降 (拼2.37，P0.05)，aSMA阳性面积无明显差异(t=1 .40，P.05)，MMP一13基因表达明显增加(t=30.75，尸0.001)，而TIMP一1和TIMP一2、MMP一2基因表达明显减少(t为11.31和15.10，33.33，P0，001)，肝功能部分改善(ALT:户1.50，尸 .05:AST:拼1 .67，尸0.05;Tbil:户3.54，P0.005;TP:片7.66，P0‘001: Alb:拼5.28，尸0.001)。Y组大鼠肝功能正常，与z组比较，Y组肝纤维化程度明显降低(好3.54，P0.01)，胶原纤维和网状纤维沉积进一步减少(t分别为7.14 和12.17，P0.001)，MDA含量明显减少(拼5.93，P0.001)，aSMA蛋白阳性面积明显减少(户1 .83，尸0 .05)，肝组织MMP一13基因表达明显增加(拼8.46， P0.001)，TIMP一1和TIMP一2、MMP一2基因表达迅速减少(t为12.63，22.46 和5 .76，P0.001)。以上结果提示:EGB有防治肝纤维化的作用，EGB通过抑制氧化应激而抑制HSC活化，降低肝组织MMP一2、TIMP一1、一2的表达，从而抑制肝纤维化的形成。EGB促进HSC凋亡/促进HSC向静止状态转变，增加肝组织MMP一13表达，抑制护r1MP一1、一2的表达，促进肝纤维化的逆转。
【图文】：

琼脂糖凝胶电泳

总RNA经琼脂糖凝胶电泳显示55、185、285三条RNA电泳带

肝组织,基因,PCR扩增产物

肝组织p一actin基因F门二PCR扩增产物(556bp)
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R575.2

【参考文献】