Kupffer细胞中NLRP3炎症小体在非酒精性脂肪肝炎中的作用机制

发布时间：2020-05-20 01:58

【摘要】：目的1、证实在NASH患者肝脏Kupffer细胞（KCs）中NLRP3炎症小体的表达。2、初步探讨NLRP3炎症小体在游离脂肪酸（FFA）激活离体KCs所致炎症反应中可能发挥的作用。 方法1、收集疑似非酒精性脂肪性肝炎患者肝脏标本，进行HE、MASSON染色，根据NAS积分分组：NAS积分4分为NASH组（5例），NAS积分3分为对照组（4例），同时进行免疫组化检测KCs、NLRP3、caspase-1等表达。2、通过胶原酶原位灌注+Percoll细胞分离液密度梯度离心方法分离小鼠KCs，鉴定后给予FFA刺激，观察其形态变化，Western blot检测刺激前后NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白的表达水平明，ELISA进一步检测KCs分泌的IL-1、IL-18的变化。 结果1、NASH患者肝脏不仅有肝细胞广泛的脂肪变、炎症细胞浸润、胶原纤维增生，还有KCs大量的聚集与激活，同时KCs中NALP3炎症小体及caspase-1表达也明显增加。2、离体培养的KCs被FFA刺激后， NLRP3（WB：0.565±0.027）、Caspase-1（WB：0.541±0.031）、ASC（WB：0.594±0.038）蛋白的表达水平较对照组NLRP3（WB：0.148±0.018）、Caspase-1（WB：0.122±0.007）、ASC（WB：0.128±0.015）明显增加（p＜0.001）；IL-1（578±36.21pg/ml）、IL-18（197±27.16pg/ml）表达水平与对照组IL-1（26.34±7.36pg/ml）、IL-18（22.17±6.28pg/ml）也随之增加（p＜0.05）。 结论1.NASH患者肝脏KCs中存在NLRP3炎症小体的表达与激活，KCs中NALP3炎症小体的激活可能导致炎症因子的释放和肝细胞损伤，在NASH的发生发展中起重要作用。2. FFA对KCs存在明显脂毒性，FAA诱导KCs炎症反应可能为NLRP3介导，继而使NLRP3、ACS、Caspase-1蛋白表达以及IL-1、IL-18的分泌增加；干扰NLRP3可能会是治疗FAA致肝脏炎性损伤的新方向。
【图文】：

图 1 ：NASH 患者肝脏标本的 HE 染色（左）及 Masson 染色（右）（光镜,×400）。Fig.1 HE(left) and Masson(right) staining for the liver specimens（×400）.3.2 免疫组化结果免疫组织化学染色检测 NALP3 蛋白的表达，棕色颗粒状物质为阳性结果常肝脏组织中棕色颗粒物质极少，且均匀分散在肝组织内，而 NASH 患者肝织中 NALP3 的表达明显上调，且集中于汇管区（图 2）。

图 1 ：NASH 患者肝脏标本的 HE 染色（左）及 Masson 染色（右）Fig.1 HE(left) and Masson(right) staining for the liver specim3.2 免疫组化结果免疫组织化学染色检测 NALP3 蛋白的表达，棕色颗粒常肝脏组织中棕色颗粒物质极少，且均匀分散在肝组织内，织中 NALP3 的表达明显上调，且集中于汇管区（图 2）。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.5

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本文编号：2671840