microRNA-146a通过Smad4调节TGF-β1诱导的肝星状细胞增殖

发布时间：2017-03-25 14:04

  本文关键词：microRNA-146a通过Smad4调节TGF-β1诱导的肝星状细胞增殖，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是多种慢性致病因素作用于肝脏引起细胞外基质（extracellular matrix，ECM）过量沉积的创伤愈合过程。肝星状细胞（hepatic stellates cell，HSC）的活化在肝纤维化发展过程中起着至关重要的作用，激活的HSC是产生ECM的主要来源细胞。TGF-β1被认为是主要的致HSC活化的细胞因子。近年来研究显示microRNA (miRNA)广泛参与调节细胞增殖、分化、凋亡等一系列重要生物学进程。miR-146a是第一个被发现与免疫功能相关的miRNA，miR-146a是否参与调控TGF-β1诱导的HSC的活化目前还未见文献报道。本研究观察miR-146a在HSC活化过程中和肝纤维化形成过程中的表达变化，并深入探讨其对HSC活化增殖的影响及其作用的分子机制，以揭示干预HSC活化的新的作用靶点。 实验采用CCl4皮下注射建立大鼠肝纤维化模型，正常组10只、CCl4处理组15只。自处理之日开始，除正常组，其他各组雄性大鼠皮下注射50%CCl4植物油溶液(1ml/kg)每周2次，，共12周；正常组给予同样剂量花生油皮下注射。12周末，取肝组织进行病理组织学和Masson胶原染色检测，并检测α-SMA在大鼠肝组织中的表达变化。通过一步法实时定量PCR检测不同浓度TGF-β1刺激的HSC和CCl4诱导的肝纤维化组织中miR-146a的表达。通过脂质体LipofectamineTM2000转染miR-146a mimics（模拟物）到大鼠肝星状细胞株HSC-T6内以观察对TGF-β1诱导的HSC-T6增殖的影响，荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率。体外培养的HSC，转染60nM miR-146a mimics进入细胞，6h后用TGF-β110ng/ml刺激细胞24h或48h后，利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法，细胞周期分析方法以及流式细胞术技术观察miR-146a对TGF-β1诱导的HSC的增殖的影响。应用生物信息方法发现Smad4是miR-146a的潜在靶点。利用RT-PCR，real-time qPCR和western blots，分别检测TGF-β1诱导的HSC中活化的标志物α-SMA和Smad4mRNA及蛋白水平的表达。 结果发现用不同浓度(0,5,10,15ng/ml) TGF-β1刺激HSC，miR-146a的表达呈剂量依赖性的下调。miR-146a在CCl4诱导的肝纤维化组织中表达也是下调的。与阴性对照组相比，转染60nM的miR-146a模拟物进入HSC可以明显减少TGF-β1诱导的α-SMA的表达。过表达miR-146a可以显著抑制TGF-β1诱导的HSC的增殖，增加细胞凋亡。生物信息技术显示Smad4是miR-146a的潜在靶点。在TGF-β1刺激的HSC中，miR-146a可以显著降低Smad4蛋白水平的表达，而不能降低其mRNA水平的表达，提示miR-146a是在转录后水平调节Smad4的表达。以上研究表明，miR-146a通过转录后抑制Smad4的表达参与调控TGF-β1诱导的HSC的增殖，这可能成为肝纤维化防治的潜在作用靶点。
【关键词】：肝纤维化 肝星状细胞 miR-146a TGF-β1 α-SMA Smad4
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.2
【目录】：

• 中英文缩写词对照5-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-12
• 实验材料12-15
• 实动动物12
• 药品与试剂12-14
• 仪器与设备14-15
• 图像分析软件15
• 实验方法15-31
• 动物的处理与模型的建立15
• 大鼠肝星状细胞的培养15-16
• 检测内容与方法16-30
• 数据处理30-31
• 实验结果31-57
• 讨论57-61
• 结论61
• 参考文献61-66
• 个人简历66
• 攻读硕士学位期间发表的论文：66-68
• 在校期间所获奖励68
• 攻读硕士学位期间参加的会议68
• 硕士期间参与主要课题研究68-69
• 致谢69-70
• 综述70-84
• 参考文献79-84

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 许蜜蝶;李维卿;余宏宇;;MicroRNAs与慢性肝脏病变相关性的研究进展[J];第二军医大学学报;2010年08期

2 周雄根;舒建昌;;微小RNA与肝纤维化关系的研究进展[J];广东医学;2011年24期

3 张新华;朱萱;;NOX通过ROS介导的信号通路与肝纤维化[J];国际消化病杂志;2011年01期

4 唐东;吴建新;;肝组织特异性基因启动子靶向干预肝纤维化的研究现状[J];国际消化病杂志;2011年02期

5 郭津生;;microRNA、细胞自噬与肝纤维化[J];临床肝胆病杂志;2013年05期

6 封丽莎;樊晓明;;microRNA在纤维化疾病中的研究进展[J];复旦学报(医学版);2012年01期

7 王圆圆;刘瑞霞;郭兵;肖瑛;石明隽;皮明婧;文箐颍;张国忠;;大鼠肾组织PETN表达下调在糖尿病肾病发展中的作用[J];生理学报;2011年04期

8 王世美;郑素军;段钟平;;肝病中TGF-β与microRNAs相互作用的研究[J];胃肠病学和肝病学杂志;2011年02期

9 郝礼森;刘小娟;张晓岚;;PTEN蛋白磷酸酶活性的作用[J];中国细胞生物学学报;2012年01期

10 韦君;樊晓明;;microRNAs在肝脏中的作用[J];世界华人消化杂志;2012年01期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 刘顺芳;癌基因DJ-1在人肝细胞癌中的作用及其机制研究[D];华中科技大学;2011年

2 安君艳;腺病毒介导的PTEN基因防治大鼠肝纤维化的体内外实验研究[D];河北医科大学;2011年

3 刘绍霞;针对TGF-β1腺病毒siRNA的制备及对模型大鼠肺间质纤维化的影响[D];郑州大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王世美;TGF-β1及靶向Smad3基因shRNA慢病毒对大鼠肝细胞系BRL-3A增殖的作用[D];山西医科大学;2011年

2 郑力搏;PTEN在CCl_4诱导大鼠肝纤维化和自发逆转肝组织中的动态表达及其与在体肝星状细胞增殖、凋亡的关系[D];河北医科大学;2011年

3 郭剑;腺病毒介导的shRNA阻断PTEN表达对体外活化肝星状细胞增殖与凋亡的影响[D];河北医科大学;2011年

4 张建;利莫那班对肝星状细胞增殖和凋亡的影响及作用机制[D];河北医科大学;2011年

5 张新华;熊果酸对大鼠肝星状细胞NOX亚基p47~(Phox)及其调控的下游信号通路的影响[D];南昌大学;2011年

6 史慧敏;内毒素对大鼠原代肝星状细胞TGF-β1表达的影响及其机制的初步研究[D];山西医科大学;2010年

7 刘小娟;RNA干扰技术阻断PTEN表达对体外活化肝星状细胞细胞周期的影响[D];河北医科大学;2010年

8 柳诗意;活血化瘀分阶段法干预乙肝肝纤维化的临床研究[D];中国中医科学院;2012年

9 韦君;microRNA-21通过PTEN/Akt通路调控人肝星状细胞基质金属蛋白酶-2的表达[D];复旦大学;2012年

10 施惠海;MicroRNA-21抑制淫羊藿素诱导肝星状细胞凋亡的研究[D];复旦大学;2012年

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本文编号：267289