内质网应激通过P38 MAPK通路上调Gro-α、IL-8促进克罗恩病肠道炎症

发布时间：2020-05-23 04:34

【摘要】：目的:本研究通过对克罗恩病(CD)患者大体标本及体外实验的研究来探讨内质网应激是否可以通过调整趋化因子的表达来促进CD肠道炎症的形成。方法:1.收集我院因CD行手术治疗患者的结肠组织病理标本,通过免疫组化检测CD患者肠道组织中内质网应激标志蛋白Grp78和趋化因子IL-8的蛋白表达情况,并与结肠癌患者癌旁结肠标本做对比。2.取HCT116结肠癌上皮细胞株进行培养,用不同浓度内质网应激诱导剂衣霉素诱导HCT116细胞发生内质网应激,或者提前1小时加入XBP1抑制剂(STF083010)、eIF2α去磷酸化抑制剂(Salubrinal)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)分别阻断IRE1-XBP1、PERK-eIF2α、P38 MAPK信号通路,然后再加入适宜浓度的衣霉素。3.通过WB检测内质网应激标志物Grp78的蛋白表达,通过qRT-PCR检测趋化因子Gro-α、IL-8的mRNA表达变化,通过ELISA检测细胞上清液中IL-8的蛋白表达。结果:1.相比结肠癌患者癌旁结肠标本,CD患者结肠黏膜Grp78、IL-8表达均明显增加。2.随着衣霉素浓度的增加,Grp78蛋白表达增加,趋化因子Gro-α、IL-8的表达也上调,在5μg/mL时最明显。3.阻断内质网应激下游的IRE1-XBP1、PERK-eIF2α信号通路对Grp78的表达和Gro-α、IL-8的表达均无影响。4.P38 MAPK抑制剂SB203580可以明显抑制衣霉素诱导的Gro-α、IL-8mRNA表达及IL-8蛋白表达。结论:1.内质网应激和IL-8参与了CD患者肠道炎症的形成。2.内质网应激可以通过上调Gro-α、IL-8的表达来促进CD肠道炎症,机制可能是通过活化p38 MAPK通路。
【图文】：

患者,结肠癌,免疫组化

子 IL-8 表达增加。为了明确内质网应激和 IL-8 是否参与了 CD 肠道炎症的发生，我们通过免疫化检测 CD 手术患者的肠道标本与结肠癌患者癌旁肠道组织标本中 Grp78 和L-8 的表达情况。结果发现 Grp78 主要在肠上皮细胞胞浆中表达，而 IL-8 在肠皮细胞和炎症细胞胞核中均有表达。从图 1 我们可以观察到相比于癌旁组织标，，CD 患者炎症部位肠组织 Grp78 和 IL-8 染色明显增强，对图片进行光密度分，结果提示 CD 患者肠道炎症组织 Grp78 和 IL-8 表达的阳性率更高，两者之间异有统计学意义（表 1）。这表明内质网应激、IL-8 的确参与了 CD 的肠道炎症。表 1 CD 患者肠组织与癌旁组织免疫组化光密度分析结果（IOD 值）癌旁组织 CD 肠道炎症组织Grp78 1224±254 8718±329*IL-8 20816±7918 75475±43148*注：与癌旁组织对比，*P＜0.05AB

衣霉素,趋化因子,霉素,细胞发生

导 HCT116 发生了内质网应激，并上调 Gro质网应激和趋化因子 Gro-α、IL-8 的关系，首先， 24h 来诱导 HCT116 细胞发生内质网应激，WB 结果显内质网应激的标志蛋白 Grp78 表达明显增加（图 2、IL-8 的 mRNA 水平的表达也增加（图 3），相较于空义，且在衣霉素浓度为 5μg/mL 时表达最明显。再胞，反应 24h，收集细胞上清做 ELISA 检测 IL-8 的霉素促进了 IL-8 蛋白水平的表达（图 4），对比空白（P＜0.05）。这些结果证实了衣霉素诱导 HCT116 发ro-α、IL-8 的表达。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R574.62

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