内毒素对大鼠腹腔肥大细胞影响的实验研究

发布时间：2020-05-23 20:52

【摘要】： 目的取大鼠腹腔肥大细胞(PMC)进行体外培养,探讨内毒素对大鼠PMC脱颗粒的影响。 方法取健康雄性Wistar大鼠36只,分离培养大鼠PMC,倒置显微镜下观察细胞的形态;台盼蓝染色观察细胞活力;甲苯胺蓝染色计算细胞纯度。加入不同浓度内毒素,将细胞分为5个组:①无LPS处理组;②0.5μg/ml LPS处理组;③1μg/ml LPS处理组;④2μg/ml LPS处理组;⑤4μg/ml LPS处理组;置于37℃、5%CO_2培养箱培养,2h后在倒置显微镜下再次观察细胞的形态;台盼蓝染色观察细胞活力;甲苯胺蓝染色观察细胞脱颗粒情况;荧光法测定上清液中组胺水平;专性底物α-N-苯甲酰-DL-精氨酸-P-硝基苯胺(BAPNA)法测定上清液中类胰蛋白酶水平;ELISA法检测上清液中细胞因子IL-4、IL-10的浓度;放免法检测上清液中细胞因子TNF-α的浓度。 结果 1、倒置显微镜下观察大鼠PMC半贴壁生长,细胞呈圆形或椭圆形,边缘清晰,胞浆内可见大小不等的颗粒。甲苯胺蓝染色显示:不同浓度LPS处理组与无LPS处理组相比大鼠PMC脱颗粒现象较明显,在1μg/ml LPS处理组时,细胞脱颗粒最明显。 2、加入不同浓度LPS培养2h后: 1)各组中大鼠PMC的存活率均在90%以上,且各组间无显著性差异(P＞0.05)。 2)不同浓度LPS处理组中大鼠PMC释放组胺和类胰蛋白酶水平均高于无LPS处理组,其差别显著,具有统计学意义(P＜0.05),但不同浓度LPS组之间无显著性差异(P＞0.05)。 3)不同浓度LPS处理组中大鼠PMC释放细胞因子IL-4、IL-10、TNF-α水平均高于无LPS处理组,其差别显著,具有统计学意义(P＜0.05),但不同浓度LPS组之间无显著性差异(P＞0.05)。 结论经LPS处理后大鼠PMC脱颗粒明显,释放组胺、类胰蛋白酶及细胞因子IL-4、IL-10、TNF-α均增加,但释放量与LPS无明显剂量依赖性,表明LPS可以诱导PMC脱颗粒释放炎症因子,导致肝病病情进展,提示在治疗肠源性内毒素血症的同时抑制MC脱颗粒可能减轻肝炎的发生发展。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R575

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