Infliximab对急性坏死性胰腺炎并MODS模型大鼠肝肾损害的防治效应

发布时间：2020-05-24 06:39

【摘要】：研究背景和目的急性胰腺炎(AP)是一种潜在的致死性疾病,临床上大多为自限性轻型胰腺炎,但仍有10%～20%患者进展为重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)。SAP是当今胰腺病学研究难题,源其起病急,病情重,发展迅速,早期常出现急性并发症。虽然近年来对SAP的治疗和监护取得了一些进展,但其死亡率仍高达20%～40%。 AP引起的肝、肾损害不但会加重AP病情,而且直接影响其预后,甚至可以发展至肝、肾功能衰竭,导致死亡。在一项对急性重症胰腺炎相关多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)的患者的回顾性研究中,具有最高死亡率的是肝衰竭患者(83%);并发急性肾功能衰竭的患者死亡率亦高达45%～50%;而联合器官衰竭中,又以肝肾衰竭死亡率最高,达到91%。因此,研究SAP继发肝、肾损伤的治疗已经成为研究热点之一。在SAP的发病机制中,“炎性介质释放学说”备受关注和重视。认为吞噬细胞过度刺激中性粒细胞导致细胞因子和炎症介质的释放,造成不同程度的全身性炎症反应,进而导致多器官功能障碍综合症(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS)。目前研究表明,在各种细胞因子中,肿瘤坏死因子(TNF-a)是引起SAP病理机制中是最重要的炎症因子之一。 TNF-a作为SAP时各种细胞因子中的第一位因子,参与诱导IL-1p、IL-6、IL-8及自身基因的表达,刺激各种炎症细胞,造成细胞因子及炎症介质的失控性释放,引起级联反应,从而引起胰腺组织坏死、血管内皮损伤以及血管通透性增加,最终造成微循环障碍和组织器官的损伤乃至衰竭。而围绕着SAP相关肝、肾损伤的机制和治疗有着众多的研究,其中TNF-a扮演着重要的角色。它可对肝细胞和肾小管直接损伤,亦通过刺激各种细胞因子的释放,产生细胞因子网络效应,促成全身炎症反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS),引起肝、肾功能障碍。 2001年,BhaticM首次提出了AP“治疗窗”的新思路,认为在AP发作和器官功能衰竭之间存在一个可供抗炎症介质治疗的“治疗窗”,运用炎症介质靶向治疗有可能逆转MODS的发生发展。有研究表明,抗TNF-a抗体的早期应用可使SAP模型72h生存率由15%增至85%,且高淀粉酶血症、胰腺出血和脂肪坏死均明显减轻。本实验的前期研究提示,应用4.5%浓度牛磺胆酸钠(NaTc)逆行注射建立SAP动物模型,建模后6h为SAP并MODS模型的TNF-a反应高峰及肝肾功能损害高峰,为ANP并MODS模型的抗炎症介质治疗窗英夫利昔单抗(Infliximab)是一种基因重组的人鼠嵌合TNF-a的免疫球蛋白的G1亚类单克隆抗体。本研究单/联用Infliximab单抗和奥曲肽(Octreotide),观察对急性坏死性胰腺炎(Acute necrotizing pancreatitis,ANP)并MODS模型中肝、肾损害的实验疗效,旨在首次阐明在抗炎症介质治疗窗应用Infliximab和Octreotide对ANP并MODS模型中肝肾损害的改善价值,为今后大规模临床研究的开展,提供实验依据。方法雌性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、Octreotide组、Infliximab治疗组和Infliximab+Octreotide治疗组,每组各8只大鼠。采用Aho法并加以改良,经胰胆管逆行注射浓度为4.5%牛磺胆酸钠(NaTc)制备ANP并MODS大鼠模型;假手术组仅翻动胰腺,十二指肠后关腹。治疗组于建模后6h抗炎症介质治疗窗早期,经鼠尾静脉注射Infliximab、Octreotide等药物。各组大鼠观察至建模后24h处死,经鼠尾静脉采血分别检测血清TNF-a、TB、ALT、肌酐等指标;取胰腺组织制作病理切片,于光镜下观察胰腺组织并进行病理评分。肝、肾组织大体观察后制作光镜和电镜病理切片。由两位专一病理医师观察光镜切片,根据病理评分标准进行评分。由两位专一电镜老师观察肝,肾组织超微结构的改变。结果 1、各治疗组与建模组比较: (1)肝肾功能生化指标及血清AMS、TNF-a、胰腺病理评分比较:各治疗组AMS、TNF-a、ALT、TB、肌酐及胰腺病理评分较建模组均显著降低(P0.05)。 (2)肝、肾组织病理改变的观察及光镜病理评分结果比较:各治疗组肝、肾组织大体、光镜及电镜观察,病变损害程度轻,且光镜病理评分各治疗组较建模组评分显著降低(P0.05)。 2、各治疗组间比较: (1)肝肾功能生化指标及血清AMS、TNF-a、胰腺病理评分比较:A、联合治疗组TNF-a、AMS、肝肾功能生化指标及胰腺病理评分较Infliximab组和Octreotide组显著降低(P0.05);B、血清AMS在各治疗组间比较无显著性差异(P0.05)。 (2)肝、肾组织病理改变的观察及光镜病理评分结果比较:A、三组治疗组在肝、肾组织大体标本观察病变损害程度相近;B、三组治疗组在肝、肾光镜病理和电镜超微结构观察,联合治疗组病变损害程度轻微。C、联合治疗组光镜病理评分较Infliximab组和Octreotide组评分显著降低(P0.05)。结论 1、早期使用Infliximab单抗可显著降低ANP并MODS模型的TNF-a水平,对肝肾损害具有显著的防治效应。 2、Infliximab和Octreotide联用可显著提高Infliximab对ANP并MODS模型肝肾损害的疗效。
【图文】：

染色质,肝细胞,细胞核,核膜

图 18：（×8900）对照组肝细胞：细胞核呈圆形，核膜完整，，染色质均匀，可见核仁，细胞器丰富，可见溶酶体，线粒体，内质网等。图 19：（×10000）建模组肝细胞：细胞核坏死性病灶，核内染色质边集，核内呈空网格样，核仁溶解。细胞质内出现溶解性病灶，灶内细胞器模糊，可见低或中等密度的絮状物质。图 20：（×8000）Octreotide：可见肝细胞核不规则，核固缩。细胞质内出现多处灶性溶解性病灶。图 21（×10000）infliximab 组：肝细胞核膜有破损，核内染色质分布尚均匀，可见核仁。

坏死性,核仁,病灶,肝细胞

图 18：（×8900）对照组肝细胞：细胞核呈圆形，核膜完整，染色质均匀，可见核仁，细胞器丰富，可见溶酶体，线粒体，内质网等。图 19：（×10000）建模组肝细胞：细胞核坏死性病灶，核内染色质边集，核内呈空网格样，核仁溶解。细胞质内出现溶解性病灶，灶内细胞器模糊，可见低或中等密度的絮状物质。图 20：（×8000）Octreotide：可见肝细胞核不规则，核固缩。细胞质内出现多处灶性溶解性病灶。图 21（×10000）infliximab 组：肝细胞核膜有破损，核内染色质分布尚均匀，可见核仁。
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R576;R459.7

【参考文献】