肝内肾素-血管紧张素-醛固酮系统在肝纤维化形成中的信号转导机制研究

发布时间：2020-05-26 14:26

【摘要】：局部组织肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)广泛地存在于各组织器官之中，对组织器官纤维化的形成具有促进作用。其效应分子血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)和醛固酮(Aldo)是重要的致炎因子，可促进细胞增殖和细胞外基质(ECM)的合成。近年研究发现：肝内RAAS与肝纤维化的形成关系密切，，AngⅡ可激活肝星状细胞(HSC)并促进ECM的合成。肝内RAAS成为肝纤维化研究的新靶点。 核转录因子KB(NF-κB)、激活蛋白1(AP-1)和EGR-1是与炎症和组织纤维化密切相关的核转录因子。它们可被各种致炎因子激活，调控与炎症和纤维化有关的基因如肿瘤坏死因子α(TNFα)、环氧合酶-2(COX-2)、α1-Ⅰ型前胶原和血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)等的转录。 目前，AngⅡ和Aldo诱导HSC激活、增殖、转化和ECM合成的信号转导机制仍未明确，有关RAAS的效应分子对HSC核转录因子通路影响的研究报告较为鲜见。 本研究试图在原有的工作基础上，运用分子生物学和细胞生物学的方法，从体内和体外研究两个方面进行系统研究，目的在于探讨AngⅡ和Aldo对HSC中NF-κB、AP-1和EGR-1等三个重要的核转录因子信号转导通路的影响，进一步阐明AngⅡ和Aldo促进HSC激活、转化、ECM合成以及促纤维化因子分泌的机制。同时观察AngⅡ是否也可作 用于枯否细胞(KC)从而促进肝纤维化的进程。 一、动物实验研究:以四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化，同时 分别以血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)一培垛普利和血管紧张素n一1 型受体(Ar一1受体)阻滞剂一氯沙坦干预4周和6周。组织学观察培噪 普利和氯沙坦对实验性肝纤维化的抑制作用;放免检测血清中透明质酸 (HA)、层粘蛋白(LN)的含量;酶图法检测肝组织中金属蛋白酶一2， 9(MMP一2，9)的活性;Westem blot检测组织中AT一1受体、PDGF一BB 和转化生长因子即(TGF一pl)的表达;电泳迁移率变更分析(EMSA) 检测组织中NF一沼的活性;TLJNEL法及免疫组化双标检测HSC和肝细 胞原位凋亡。结果显示:研究发现:培噪普利和氯沙坦对实验性肝纤维 化具有抑制作用;培噪普利和氯沙坦可抑制肝组织NF一忍活性以及致纤 维化因子ToF一pl和pDGF一BB的蛋白表达和MMp一2、MMp一9的活性。 培噪普利和氯沙坦不能诱导HSC和肝细胞的凋亡。 二、细胞水平研究:采用HSC一T6细胞株，分别予细胞外调节蛋 白激酶1/2(ERKI/2)特异性抑制剂UO 126、户工1受体阻滞剂irbesartan 和抗氧化剂N一乙酸半胧氨酸(NAC)预先处理细胞1小时后，再予Angll 或Aldo刺激。 1.Angll和Aldo可通过ERK通路作用于Hse。westem blot结 果显示:Angll和Aldo可诱导磷酸化P42/44的表达，并呈时间依赖性， 1 0 min达到峰值，之后逐渐减低。U0126可抑制磷酸化P42/44的表达。 Ithesartan可抑制Angll诱导的磷酸化P42/44的表达。 2.Angn和Aldo对HsC中NF一出通路的影响。结果显示:Angn 和Aldo可增强NF一虑的DNA结合活性并促使NF一沼核转位，该活性 可被irbesa到习n和ACEI抑制;Uo126则不能抑制其活性;NAC可显著 抑制Angn诱导的NF一出的活化，部分抑制Aldo诱导的NF一沼激活。 此外，Angn和Aldo可抑制细胞浆内I沼a的蛋白质水平。Angll和Aldo 一2- 可上调TN FamRNA和COX一2蛋白的表达。 3.Angn和Aldo对HSC中AP一1通路的影响。结果显示:Angll 和Aldo可增强HSC的AP一1的DNA结合活性。ithesartan和ACEI可 显著抑制AP一1的活性;uo 126和NAc可以显著抑制Angn诱导的AP一1 的活化，部分抑制Aldo诱导的AP一1的活化。Angll和Aldo可诱导al一I 型前胶原mRNA的表达。 4.Angll和Aldo对Hsc中 EGR一1通路的影响。结果显示:Angn 和Aldo可显著诱导HSC的EGR一1 DNA结合活性。irbesartan可抑制 EGR一1的DNA结合活性且呈浓度依赖性。uo126可以显著抑制Angll 和Aldo诱导的EGR一1的活化。ACEI对EGR一1的活性的影响尚不确定， AcEI的浓度为1林M和10nM时，EGR一1的活性被显著抑制，当浓度 减至o.IllM时，EGR一1活性反而显著增加。Angn和Akl。可增加Hsc PDGF一BB的蛋白质水平。 5.原代培养Kc，免疫组化显示AT~1受体可在Kc中表达，Angll 可促使NF一沼核转位，并诱导PDGF一BB和TGF一盯的表达。 通过以上研究可以得出以下结论: 1.培噪普利和氯沙坦对实验性肝纤维化具有抑制作用;培噪普利 和氯沙坦可抑制肝组织NF一出活性以及致纤维化因子TGF一pl和 PDGF一BB的蛋白表达和MMP一2、MMP一9的活性。培噪普利和氯沙坦 不能诱导 HSC和肝细胞的凋亡。 Ang Angll和 11和Aldo Aldo可经ERK通路诱导HSC AP一1和EGR一1活性增 强; 而与 对HSC的NF一虑活性的诱导作用不依赖ERK通路， I沼的磷酸化和降解有关。 3.Angll和Aldo可促进NF 表达;Angll和Aldo可促进AP- 一沼调控转录基因 调控转录基因al- TNFa和COX一2的 Ang 11和Aldo可促进EoR一l 调控转录基因PDGF一BB 一3- 型前胶原的表达; 的蛋白质表达。 4.肝枯否细胞可表达AT.1受体;Angll可激活枯否细胞NF一虑并促 使其核内转移。Angn可促进枯否细胞PDGF一BB和TGF一pl的蛋白质 表达。
【图文】：

表1.各组大鼠肝纤维化分级(鼠数)4周6周组别0▲1234n01234n模型组015017000336培噪普利组*132006011406氯沙坦组*142007002406对照组*△600006600006与模型组比较，*P<0.05;与培垛普利组(氯沙坦组)比较，△P<0.05;培噪普利(4周)与培噪普利组(6周)比较，P<0.05‘0、l、2、3、4为纤维化分级

表1.各组大鼠肝纤维化分级(鼠数)4周6周组别0▲1234n01234n模型组015017000336培噪普利组*132006011406氯沙坦组*142007002406对照组*△600006600006与模型组比较，*P<0.05;与培垛普利组(氯沙坦组)比较，△P<0.05;培噪普利(4周)与培噪普利组(6周)比较，P<0.05‘0、l、2、3、4为纤维化分级
【学位授予单位】：第一军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R575.2

【参考文献】

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1 洪志飞，李月红;肾素－血管紧张素系统研究的新动向[J];日本医学介绍;1996年05期

本文编号：2681977