人端粒酶逆转录酶基因诱导永生化小鼠肝星状细胞系的建立及鉴定

发布时间：2020-06-02 00:47

【摘要】：目的:建立长期传代、形态和生物学特性稳定的永生化小鼠肝星状细(mouse hepatic stellate cells,mHSCs)系。方法:分离、培养小鼠的原代HSCs,通过携带人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的逆转录病毒转染原代培养的HSCs,经G418筛选后挑选单个细胞进行单克隆培养及传代,命名为hTERT-mHSCs。TRAP-ELISA法检测转染hTERT基因后细胞的端粒酶活性;免疫细胞化学技术检测α-SMA、Desmin及Vimentin的表达;实时荧光定量PCR检测相关基因mRNA的表达;流式细胞术检测CD40等细胞表面免疫分子的表达;TGF-β1刺激细胞后qRT-PCR法检测α1(Ⅰ)型胶原的表达变化。结果:hTERT-mHSCs可以稳定传代培养,hTERT-mHSCs的hTERT基因的表达检测结果阳性。细胞免疫化学染色显示其能表达α-SMA、Desmin及Vimentin。qRT-PCR结果显示其相关基因的mRNA表达相比较原代培养的小鼠HSCs没有明显的表达差异(p0.05)。流式细胞术结果显示其表达的免疫分子相比原代培养的小鼠HSCs也没有明显差异。TGF-β1刺激转染及未转染的小鼠HSCs后,α1(Ⅰ)型胶原的表达都明显增加。结论:成功建立永生化小鼠肝星状细胞系,该细胞系的基本生物学特征与活化的原代小鼠肝星状细胞相似。
【图文】：

肝脏细胞,离心法,原代培养,密度

肝脏其它非实质细胞层图1 经percoll梯度密度离心法从C57/B6小鼠肝脏分离出的肝脏细胞的分层情况：第一层为肝细胞碎片层，此层含有很多的肝细胞和细胞碎片；第二层为絮状的 HSCs 层；第三层为肝脏其它非实质细胞如 DC、Kuffer 等细胞层；第四层为红细胞层A BC D图 2 从 C57/B6 小鼠肝脏分离出的 HSCs 原代培养时形态特征的变化情况：A：新分离的 HSCs(x100)；B: 原代培养 2d 的 HSCs(x100)；C: 原代培养 7d 的HSCs(x100)； D：原代培养 14d 的 HSCs(x100)。14

原代培养,形态特征,肝细胞,肝脏

细胞片层肝星状细层（絮状红细胞层肝脏其它实质细胞经percoll梯度密度离心法从C57/B6小鼠肝脏分离出的肝脏细胞的分第一层为肝细胞碎片层，此层含有很多的肝细胞和细胞碎片；第二层为SCs 层；第三层为肝脏其它非实质细胞如 DC、Kuffer 等细胞层；第四层层A B
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.2

【参考文献】