溃疡性结肠炎差异蛋白质的筛选研究

发布时间：2020-06-03 05:36

【摘要】： 背景:溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种慢性非特异性结肠炎症。近年来,其发病率在世界范围内呈明显上升趋势,发病人群多为青壮年,严重影响了患者生活质量和社会生产力。UC的发病机制仍不清楚,缺乏有效的早期诊断标志物和治疗靶点。蛋白质组学研究方法和技术为溃疡性结肠炎的早期诊断、防治和发病机制的研究提供了理论依据。 目的:应用蛋白质组学双向凝胶电泳(Two-Dimensionalgel Electrophoresis,2-DE)和质谱技术(Mass Speetrum,Ms)寻找并鉴定UC患者与健康对照者血清之间的差异表达蛋白质。 方法: 1.以正常人血清样品为研究对象,对白蛋白/IgG球蛋白去除后血清样品、全血清进行PH梯度2-DE分离,凝胶经硝酸银染色后,利用PDQuest软件对2-DE图谱进行重复性分析,并对不同处理方法的血清2-DE图像的结果进行比较,以确定后续UC双向凝胶电泳方法。 2.选择溃疡性结肠炎活动期患者作为实验组;选择健康志愿者作为正常对照组。运用2-DE技术对其进行血清蛋白质差异表达分析。 3.结合软件分析和手工筛选,从表达差异的蛋白质点中选取12个清晰且表达水平改变明显的点作为最终质谱鉴定的对象;采用肽质量指纹图谱(PMF)的方法,并使用国际互联网上的蛋白质数据库提供的检索程序对差异蛋白质进行鉴定。 结果: 1.与全血清直接上样比较,白蛋白/IgG球蛋白去除后血清样品上样蛋白丢失较少,凝胶硝酸银染色显示蛋白质染色深、分散清楚。从而建立了白蛋白/IgG球蛋白去除后血清上样进行双向电泳的方法,获得分辨率较高且重复性好的人全血请蛋白质2-DE图谱,为分离高质量的蛋白质点进行UC血清蛋白组学研究奠定了良好的工作基础。 2.比较UC和配对的正常组血清的2-DE图谱,找出12个差异蛋白质点,结合基质辅助激光解吸离子电离飞行时间质谱(Matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)成功鉴定9个蛋白点,其中6个表达上调:触珠蛋白、热休克转录因子2、酪氨酸激酶受体、醛脱氢酶、载脂蛋白C-Ⅲ、中心粒旁物质1;3个表达下调:角蛋白1、细丝蛋白A结合蛋白1、肌球蛋白3。差异蛋白的功能主要涉及机体激素调节、免疫应答、氧化应激、信号传导、细胞骨架等。 结论: 1.白蛋白/IgG球蛋白去除后血清样品双向凝胶电泳分析法具有蛋白丢失少、操作简便、重复性好的特性,是血清蛋白质组学研究的有效手段。 2.采用蛋白质组学2-DE和质谱技术,筛选并鉴定出了与溃疡性结肠炎相关的9个血清蛋白质,为研究UC的生物学行为提供新的分子标志物,为探讨UC在蛋白质水平的发生机制奠定基础。
【图文】：

泳仪、二向电泳是在同一电泳槽中同时进行的情况下。未去除白蛋白/IgG的血清蛋白2一DE凝胶图谱(图3)，由于大量白蛋白和IgG的存在，有很多平行条带，掩盖了一些低丰度蛋白质点。而去除白蛋白/IgG的蛋白图谱(图4)与图3比较，水平条带明显减少，蛋白质斑点数量明显增加。通过PDQuest7.1.o软件包分析发现在未去除白蛋白/IgG的血清的双向凝胶电泳图谱中，检测到约396个蛋白点，而在去除白蛋白/IgG的血清的双向凝胶电泳图谱中，检测到约439个蛋白点。

图9:spot3酶解后的肤质量指纹图谱自O翻自114侧..匆月‘比.妇弓…协n.句no翻目1.人器黑翠日O协州牛栩吐门pl肠山叫.J.，困l协「司」心叭手川一令歇币亡幽.口“.:’…翎.11二贺电妞扭拙妞兔傲电份饱傲摺饱也恤饱怡妞妞电〔;;…蓬撇.0‘闷由“小I，心卜4.‘.，.卜功解，J.曰.‘..‘，户丫心，.U.!….丁以…〔丫〔丫.伪肠J」t.‘比，，，冬.弓…冬肠匕卜，’蒸理口之岭:二习3幻蒸1、队“皿‘.橄n蒸p奄晚目t丫啼比十hn公刁乳二‘心卜n月卜月‘勿卜n创1.]‘比卜一、n(二J】山比睁价n阔叮小心﨏阀哪助﨑、

本文编号：2694375