逆转录酶抑制剂膦甲酸钠用于治疗乙型肝炎病毒感染的理论与实践

发布时间：2020-06-03 08:53

【摘要】：具有逆转录特征的生物酶广泛存在于乙型肝炎病毒(HBV)、人类T淋巴细胞病毒(HTLV)、鼠乳腺癌病毒(MMTV)、人类自身免疫缺陷病毒(HIV)、花椰菜花叶病毒(CaMV)、劳氏肉瘤病毒(RSV)等多种动植物病毒中，它们对人类的自身健康和生产生活产生了巨大的不良影响。针对逆向转录酶 (RT)的药物研究具有广泛的重要意义。通常情况下，药物研发过程必须要设计出适合于高通量筛选的靶位模型。传统的RT活性的~3H掺入检测法由于其操作过程复杂和放射性核素使用方面固有的缺陷，已不能满足当前的需要，而且难以发展成为高通量或半高通量的筛选技术。 我们在国内首次构建了RT活性的ELISA检测法，应用预先包被于Covalink 96孔板的poly(A)模板和不同来源的RT将生物素标记的dUTP掺入，用辣根过氧化物酶反应系统检测酶活性，在一定时间范围内，反映酶活性的OD值的大小与时间呈线性关系。通过与放射性核素掺入检测法进行比较，显示两种方法有明显的一致性(HIV-1 RT：r~2=0.997)。应用ELISA法检测奈韦拉平(NVP)、膦甲酸钠(PFA)对HIV-1 RT活性的抑制作用，显示出药物作用的剂量依赖性，测得IC_(50)分别为0.23±0.12μg／ml、0.21±0.08μg／ml。同时，对ELISA法的重复性、稳定性及用于抑制剂研究的特异性和敏感性进行了评价，证明了应用ELISA法检测HIV-1 RT的活性具有简便、快速、重复性好、特异性强的特点，适用于抗HIV-1 RT药物的大样品量筛选工作，，并可发展成为高通量技术。在成功构建HIV-1 RT ELISA检测方法的基础上，利用该方法，进一步检测了莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶(M-MLV-RT)、禽类成髓细胞瘤病毒逆转录酶(AMV-RT)及鸭乙型肝炎复制复合体(DHBV RCs)的活性，同时还检测了HIV-1感染细胞上清中RT的活性，证明ELISA法适用于具有逆转录特征的多种病毒酶的体外活性检测。 随着高效抗逆转录病毒疗法(HAART)在艾滋病患者中的广泛应用，抗HIV感染的联合化疗取得了极大成功，HIV的传播得到了一定程度的控制，最新的研究表明，仅仅联合使用两个RT抑制剂如齐多夫定(AZT)和奈韦拉平(NVP)亦可使患者血液中HIV滴度降至检测不到的水平。然而，HBV感染的治疗却面临着相当的困境，1) 与抗HIV RT的药物相比，可供选择抗HBV RT的治疗药物十分有限；2) 伴随某种药物的长期单一应用，耐药病毒株不断出现。寻找新的不同机制的抗HBV药物，增加联合用药的候
【学位授予单位】：中国协和医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R512.62

【参考文献】

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本文编号：2694587