慢性重型乙肝患者外周血单个核细胞Toll样受体2和9的表达研究

发布时间：2020-06-04 16:54

【摘要】：目的通过对慢性重型乙肝患者外周血单个核细胞TLR2和TLR9的表达研究,探讨TLR2和TLR9在慢性重型乙肝发病机制中的作用及与病情严重程度的关系。 方法采集湘雅医院2010年3月至2011年2月慢性重型乙肝住院患者45例(实验组)和健康志愿者23例(对照组)的肝素抗凝血和促凝血。肝素抗凝血分离外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测TLR2和TLR9蛋白在淋巴细胞和单核细胞上的表达水平,用荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞TLR2和TLR9 mRNA的相对表达水平。促凝血分离血清,用ELISA方法检测血清TNF-α的浓度。 结果1.流式检测结果：(1)实验组和对照组单核细胞TLR2蛋白表达阳性率(%)分别为92.11±16.43和81.84±29.80,差异无统计学意义(P0.05)；实验组和对照组淋巴细胞TLR2蛋白表达阳性率(%)分别为9.73+5.37和2.18±2.46,差异无统计学意义(P0.05)；实验组和对照组单核细胞TLR2蛋白荧光强度分别为149.82+43.93和170.25±76.43,差异无统计学意义(P0.05)；实验组和对照组淋巴细胞TLR2蛋白荧光强度分别为6.04±5.21和4.26+2.46,差异无统计学意义(P0.05)。(2)实验组和对照组单核细胞TLR9蛋白表达阳性率(%)分别为81.65±32.31和55.03±21.60,差异无统计学意义(P0.05)；实验组和对照组淋巴细胞TLR9蛋白表达阳性率(%)分别为75.64+37.15和23.29±18.87,差异有统计学意义(P0.05)；实验组和对照组单核细胞TLR9蛋白荧光强度分别为140.614±48.35和225.85±90.11,差异有统计学意义(P0.05)；实验组和对照组淋巴细胞TLR9蛋白荧光强度分别为37.39±18.36和19.51±11.13,差异有统计学意义(P0.05)。2.外周血单个核细胞TLR2和TLR9 mRNA的检测结果：实验组和对照组TLR2 mRNA的相对表达量分别为0.209±0.226和0.356+0.310,差异无统计学意义(P0.05)；实验组和对照组TLR9 mRNA的相对表达量分别为0.014+0.028和0.253±0.159,差异有统计学意义(P0.05)。3.实验组和对照组血清TNF-α水平(pg/m1)分别为260.15+71.35和158.66±99.23,差异有统计学意义(P0.05)。4.与临床资料的相关性分析：单核细胞TLR9蛋白荧光强度和HBeAg呈正相关(r=0.382,P0.05)；TLR9 mRNA的相对表达量和PTA呈正相关(r=0.313,P0.05)；TNF-α和PTA呈负相关(r=-0.372, P0.05); TLR9 mRNA的相对表达量和单核细胞TLR9蛋白荧光强度呈正相关(r=0.459,P0.01)。 结论(1)TLR2主要表达在单核细胞上,淋巴细胞上表达很弱。TLR9在单核细胞和淋巴细胞上均有一定比例的表达。(2)TLR9表达降低与慢性重型乙肝的发病机理有关。(3)TLR9与慢性重型乙肝的病情严重程度呈负相关。TNF-α与慢性重型乙肝的病情严重程度呈正相关。
【图文】：

红细胞沉于管底，，而粒细胞则紧贴在压积红细胞上呈一层用很薄的白膜(见图2一1)。稀释的瓶液稀释的血浆 2030了了r吸延;“垃个梭细旅分离液一粒细抱红细饱图2一1淋巴细胞分离液提取PBMC(4)吸弃最上层，注意不要碰到第二层，慢慢把第二层全部收集在另一个IOml离心管中。(5)加smID一PBS，用毛细吸管轻轻吹吸混匀， 1500转/分水平离心10分钟，低速离心可去除细胞悬液中残留的血小板以及残留的淋巴细胞分离液。同上用D一PBS洗涤2次。(6)最后一次弃去上清，牛鲍氏盘计数后，用PBs配成1护/ml的浓度取500pL用来流式检测。(7)将剩余的PBMC离心，弃去上清，加入 Trazollml，充分震荡混匀，如有细胞团块，用加样器吹吸数次直至看不见细胞团块，一70OC冷冻保存。2.2.3流式细胞仪检测 PBMCTLRZ和TLRg的表达(l)准备2根流式管，分别标记I和11

卜层:RNA清澈透明，约为Trizol的60%;中间:DNA为薄薄的一层白膜;下层:蛋白质(酚一氯仿)，为红色液体。小心吸取清澈透明的__!层水相 400pL至另一个l.smlEP中，避免触及中间层(见图2一2)。犷今矛玲‘李迄;逸誉--一十渊A(酒砚娜哪渊“~水二洲}碱一p【成创n孰一一一r-j\\厂裕~一一一石、了图2一 2TRIZOL提取RNA(4)加入500林L异丙醇，混匀巧秒后置于一20℃冰箱中2小时使RNA沉淀
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R512.62

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本文编号：2696685