肿瘤坏死因子α对暴发性肝衰竭血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达的研究

发布时间：2020-06-06 16:02

【摘要】：前言 重型肝炎的预后差,病死率高,肝性脑病是严重的并发症,其中伴有不同程度的脑水肿,可直接导致死亡。但合并脑水肿的发生机制不很清楚,其中血脑屏障渗透性的增高是主要的表现,具体发生机制有待深入的研究。 实验材料与方法 重型肝炎组:29例患者临床死亡后经肝组织学检查证实为重型肝炎。对照组:20例为交通意外死亡者,经尸检确认不存在严重的肝组织炎症。 实验动物:雄性Balb/c小鼠,6-8周龄,体重18-22g,SPF级,由中国医科大学动物中心提供。 实验方法 脑组织HE染色,光镜下观察脑组织病理形态学变化及脑组织水肿程度分级。电镜下观察脑组织BBB的超微结构特点。 重型肝炎患者脑组织TJ蛋白ZO-1免疫组织化学染色。 实验性Balb/c小鼠急性肝坏死后脑组织TJ蛋白ZO-1免疫组织化学染色、Western blot方法检测脑组织ZO-1的相对含量和Real Time QRTPCR方法检测ZO-1 mRNA的相对含量。 TNFα干预后检测实验性Bslh/c小鼠急性肝坏死后脑组织上述相同内容的变化。
【图文】：

上述免疫组织化学染色结果经图象分析系统测得光密度值(OD值)，与正常对照组进行均数比较后显示，重型肝炎患者脑组织20一1的阳性显色减弱，有统计学上的差异(图1)，P<0.01。Balb/C小鼠脑组织20一1蛋白的免疫组化:NS组中可见到几乎整张切片上，沿血管EC内膜或胞浆内很强的阳性反应。肝衰竭组中，2小时血管内阳性染色明显减弱，6和9小时在整张切片上未见到棕褐色染色(照片4A、4B)。图象分析系统测得光密度值(OD值)，与正常对照组进行均数比较后显示，FHF小鼠脑组织20一1的阳性显色减弱，有统计学上的差异(图2)

225KDa处有明显的条带，在肝衰竭组中，20一1蛋白的表达减弱，h2时为0.77土0.03，在6h和gh时更为明显(分别为0.54土0.07和0.44土0.06)，各时间点较对照组均有显著性差异(P<0.01)(图3)。图3各组不同时间脑组织20一1蛋白相对含量4.20一1mRNA的表达电泳结果和OD值结果显示，从组织样品中提取出的To以NRA纯度较好。A260/A280约2.0左右。R械T汕eCPR检测结果显示，以构建的NRA作为标准品可以得到较好的扩增曲线、标准曲线和融解曲线，标准曲线相关系数大于0.98，可以在宽广的范围内进行准确定量，扩增效率0.8<e<1.;2融解曲线峰形单一，mT值在87土1之间，说明反应特异性好，阴性对照未检出，，说明反应体系无污染(图4A、4B)。RealTimeCPR检测结果显示
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R575.3

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本文编号：2699926