淋巴瘀滞对肝组织瘦素免疫反应阳性细胞结构影响的形态学观察

发布时间：2020-06-07 09:00

【摘要】：目的: 肝脏是人体内最重要的器官之一,不仅在物质代谢方面与全身各组织器官密切相关,而且还具有分泌,排泄和生物转化功能,特别是在脂肪代谢中,肝脏起着重要的作用。瘦素是1994年鉴定的由肥胖基因(ob基因)编码的产物,有抑制食欲,减少能量摄取,增加能量消耗,抑制脂肪合成的作用,对脂肪的物质代谢有着重要的调节作用。众所周知,淋巴管道是一种单向引流管道系统,主要从各器官或组织回收液体、脂肪和蛋白质等大分子物质,肝脏可以产生大量淋巴,胸导管的淋巴有近一半来自肝脏。了解肝组织瘦素的表达,对脂肪代谢的调节,以及肝内淋巴管在肝脏的物质代谢中的作用,具有重要的生理和病理意义。本实验拟通过对正常SD大鼠和结扎胸导管模型动物肝组织免疫反应阳性细胞形态学观察,为探讨肝脏和瘦素的关系,以及淋巴淤滞对肝组织形态结构的影响,提供形态学实验证据。方法: 1实验动物与取材选用健康SD大鼠(由河北医科大学实验动物中心提供)30只,雌雄不拘,体重250～300g,随机分为实验(手术20只)组和对照(假手术10只)组;实验前2个小时喂食脂类食物,经6%水合氯醛(5ml/kg)腹腔注射麻醉下,于腹部行胸导管手术结扎,而对照组只充分游离胸导管而不结扎。术后的实验动物,常规喂养,术后六个月取材,用于光镜和电镜组织样品的制备。 2光镜样品制备与观察肝脏石蜡包埋组织切片,行常规HE染色和光镜观察;以显示肝脏细微结构,以及肝内脉管系统的分布特点。 3免疫组织化学染色与光镜观察对照和实验组SD大鼠肝组织石蜡切片,行瘦素免疫组织化学染色,光镜观察瘦素及其受体免疫组织化学的结果,在肝组织内各类细胞上的免疫反应阳性表达。 4透射电镜样品制备与观察肝组织标本行常规透射电镜样品制备,肝组织超薄切片,进行透射电镜观察;以揭示SD大鼠肝组织的超微结构特点,以及实验性淋巴淤滞对肝组织超微结构的影响。结果: 1实验手术中肉眼观察所见因术前给予实验动物脂类食物喂养,大量乳糜物质,进入肠系膜淋巴管,使得肠系膜淋巴,肠干,胸导管均变成乳白色,容易观察。在结扎部位下端,大量乳白色的乳糜物质再此聚集,使得此部位的胸导管充盈、扩张,管壁变薄、透亮,而结扎部位上端则没有下端变化明显。实验中肉眼可见,假手术组SD大鼠的肝脏外形正常,呈暗红色,被膜光滑;而在胸导管结扎的模型组动物,其肝脏的体积明显增大,肝脏的边缘变圆钝,包膜紧张,表面无光泽。 2 HE染色切片光镜观察在对照组动物的HE组织切片,肝脏组织结构完整,中央静脉位于肝小叶的中央,肝板呈条索状向中央静脉汇聚,肝血窦位于肝索之间,肝板之间的空隙和肝血窦相互连接,肝细胞和肝血窦结构较清晰。在肝组织切片的门管区,可见三个主要管道,小叶间动脉、小叶间静脉和小叶间胆管。实验组SD大鼠术后6个月的肝组织,石蜡切片HE染色处理后,光镜下观察可见肝小叶中央静脉形态不规则,管腔扩张,内皮多出现断裂,其附近肝血窦明显增宽,肝索排列紊乱。在变形肝小叶的中央静脉周围,可见有些肝细胞出现大小不等的脂滴,而且,可见空泡样的脂肪细胞明显增多。 3免疫组织化学染色光镜观察在正常对照组SD大鼠的肝组织内,出现均匀的瘦素免疫反应阳性结果,呈棕褐色着色颗粒,在肝中央静脉和肝门管区附近,阳性细胞的棕褐色免疫反应有所增强。在实验组SD大鼠,肝组织瘦素免疫反应强阳性棕褐色颗粒,较对照组明显增多;在肝中央静脉和肝门管区,强阳性反应也相对较多;并且,在实验组的脂肪细胞和肝细胞内脂滴附近,也可见到瘦素免疫强阳性棕褐色着色反应。模型组SD大鼠肝组织,出现瘦素阳性表达区域,和对照组相比,有统计学意义的扩大。 4超薄组织切片透射电镜观察对照组SD大鼠肝组织透射电镜观察显示,对照组SD大鼠肝细胞膜结构清楚,胞质内胞质丰富电子密度较低,胞核呈圆形或椭圆型,核膜较薄,且连续完整。临近肝血窦的窦周隙,可见少量的结缔组织,在肝血窦和肝细胞之间的窦周隙内,还可见细小的数量较多微绒毛,但无基底膜。两个肝细胞之间的沟样细胞间隙,构成毛细胆管。在肝血窦的窦壁,可见扁平的内皮细胞,还可见kupffer细胞,其体积较大,有胞质突起且形态不规则,胞质的大部分突入窦腔,小部分可依附于内皮上,或穿过内皮进入窦腔内。实验组SD大鼠肝细胞出现明显改变,肝细胞核的核膜增厚,核膜孔增大,核内染色质聚集成一体,核内基质分布不均匀。肝细胞内胞质空旷,细胞基质增多,电子密度降低,脂类物质沉积,似肝细胞水肿和脂肪变的表现。在窦周隙内,常可观察到脂类物质的沉积,结缔组织的增多。在肝细胞之间,也可见到脂质物质的沉积,结缔组织纤维的增多。偶见肝细胞的凋亡现象。结论: 1无论在生理还是病理情况下,SD大鼠肝细胞均呈现瘦素免疫反应阳性,而且,淋巴淤滞使肝细胞瘦素表达增强。 2肝脏的淋巴回流主要通过胸导管,在腹部手术结扎大鼠胸导管,可成功建立肝淋巴淤滞的实验动物模型,而且,造模的成功率较高。 3结扎大鼠胸导管导致肝淋巴回流障碍,肝淋巴淤滞可诱发肝组织内脂质沉积、脂肪样变和肝细胞水肿甚至凋亡。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575

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