TLR9在CHB患者PBMCs中的表达及CpG-ODN对TLR9调节作用的研究

发布时间：2020-06-08 17:12

【摘要】： 目的:通过测定慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B, CHB)患者外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMCs)中病毒核酸识别受体-TLR9(Toll like receptor 9, TLR9)的表达情况,了解HBV感染与TLR9的相关关系。并通过CpG寡脱氧核苷酸( CpG oligodeoxynucleotides, CpG-ODN)对CHB患者PBMCs中TLR9调节作用的研究,探讨是否可以通过CpG-ODN对CHB患者PBMCs中TLR9表达的调节,起到抵抗HBV感染的作用,为今后抗HBV感染有效药物的筛选提供实验平台。 方法:(1)收集入院治疗的CHB患者,检测乙肝两对半和HBV DNA拷贝数,据测定结果设实验组(CHB患者组),对照组(健康志愿者组)。采用Optiprep(TM混合法)分离实验对象PBMCs,RT-PCR法检测PBMCs中TLR9 mRNA的表达情况。(2)CpG-ODN分别对CHB患者和健康志愿者PBMCs进行体外刺激,以1640培养基为非刺激空白对照。通过RT-PCR方法检测刺激前后TLR9 mRNA的表达情况;ELISA方法检测PBMCs培养上清中IFN-α的浓度;细胞组织化学方法检测刺激前后TLR9蛋白水平的表达情况。 结果:(1)CHB患者PBMCs中TLR9的表达情况:RT-PCR结果显示CHB患者组TLR9在PBMCs中的表达明显低于健康对照组(P0.01)(;2)CpG-ODN体外刺激PBMCs后TLR9的表达情况:RT-PCR结果证明,CpG-ODN刺激后CHB患者和健康志愿者PBMCs TLR9 mRNA的表达均明显高于其各自的1640空白对照组(P0.01,P0.01);但是,CpG-ODN体外刺激后,CHB患者CpG-ODN刺激组TLR9 mRNA的表达仍低于健康志愿者1640空白对照组(P0.01);(3)CpG-ODN体外刺激PBMCs后IFN-α的分泌情况:CpG-ODN体外刺激后,CHB患者和健康志愿者PBMCs分泌IFN-α的水平分别与其各自的1640空白对照组相比较有明显增加(P0.01,P0.01);但是CpG-ODN刺激后,CHB患者PBMCs分泌IFN-α的水平低于健康志愿者(P0.01);(4)PBMCs中TLR9 mRNA的表达与培养上清中IFN-α含量的相关性分析:PBMCs中TLR9 mRNA的表达与培养上清中IFN-α的含量呈正相关,相关系数为0.686(P0.01);(5)细胞免疫化学结果证明,CpG-ODN刺激后CHB患者和健康志愿者PBMCs胞浆中TLR9的受体表达阳性率均有所升高。 结论:CHB患者PBMCs中TLR9表达显著低于健康对照,提示CHB患者PBMCs识别HBV核酸DNA的能力下降;CHB患者和健康对照PBMCs中TLR9的表达与IFN-α的分泌存在明显正相关性,提示TLR9的表达水平与CHB患者和健康对照PBMCs抗HBV感染的能力存在相关关系;CpG-ODN可以有效地激活CHB患者和健康对照PBMCs中TLR9的表达,同时增强PBMCs对I-型IFN的分泌,提示可以通过采用CpG-ODN促使机体的天然免疫系统发挥抗HBV感染的效应。
【图文】：

标本 PBMCs 提取总 RNA，取等量（10μl）加入各琼脂糖加样孔中进行1 可见由 PBMCs 提取的细胞总 RNA 质量较好，经 1.2V 15min，清晰可见 18s 和 28s 两条电泳条带，28s 条 18s 条带。提取产物无 DNA 污染，无降解。 结果物电泳，进行光密度扫描分析，目的条带 TLR9 与光密度比值即为半定量分析结果。

各实验组，取等量（5μl）内参β-actin与TLR9PCR产物，加入同一琼脂糖加样孔中电泳
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R512.62

【引证文献】

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1 高珍;HBcAg重组腺病毒转染人PBMCs对TLR9和IRF7表达的影响[D];南昌大学;2011年

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本文编号：2703392