微小RNA-138-5p调控自噬参与肝再生的机制研究

发布时间：2020-06-08 23:51

【摘要】：目的病毒性肝炎、肝癌、肝硬化及肝衰竭等肝病在我国高发,严重威胁人们的生命健康,肝切除及肝脏移植手术是治疗许多肝脏疾病的有效手段,因此改善肝脏功能、促进肝再生对于减轻肝损伤、提高患者预后意义重大。当前,关于miRNA与肝再生的研究越来越多,但其具体机制尚未完全阐述。本研究通过探讨微小RNA-138-5p靶向调控Atg7介导的自噬对小鼠肝部分切除术后肝再生的作用及机制,以期对临床工作中肝保护提供新的思路。方法按随机数字表法对小鼠进行分组。建立小鼠70%肝部分切除模型,qRT-PCR检测不同时间点残肝组织内miRNA-138-5p相对表达量。常规培养AML12小鼠肝细胞,以0～25ng/μl不同浓度的HGF(肝细胞生长因子)处理AML12细胞,qRT-PCR检测miRNA-138-5p相对表达量。以miR-138-5p模拟物处理AML12小鼠肝细胞和小鼠,利用CCK-8法、EdU细胞增殖检测法和免疫组化染色检测肝细胞增殖情况。术前7d用miR-182-5p模拟物及其对照处理小鼠,术后检测肝/体重比变化情况。Western blot检测小鼠70%肝部分切除术后残肝组织内LC3表达变化情况。miR-138-5p模拟物处理AML12细胞后,GFP-RFP-LC3自噬双标腺病毒转染细胞后荧光显微镜下观察自噬体形成情况。使用miR-138-5p模拟物及自噬抑制剂3-MA分别处理细胞和小鼠,CCK-8检测肝细胞增殖变化情况。Targetscan7.2分析miR-138-5p与Atg7基因相关性。Western blot检测miR-138-5p模拟物或抑制物处理细胞后Atg7表达情况。以miR-138-5p模拟物和Atg7特定干扰RNA同时处理肝细胞后,免疫荧光染色检测LC3表达分布情况和EdU细胞增殖检测法检测肝细胞增殖变化情况。结果HGF处理细胞后,miR-138-5p表达量升高,且具有浓度依赖型。肝部分切除术后残余肝组织内miR-138-5p表达量随时间延长逐渐升高,于术后36h达峰值,随后逐渐降至正常。过表达miR-138-5p,可促进肝细胞增殖,促进肝细胞内PCNA表达和增强肝再生。肝部分切除术后残余肝组织内LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低。过表达miR-138-5p可抑制肝细胞自噬。抑制自噬可增强miR-138-5p对肝再生的促进作用。Targetscan7.2预测显示miR-138-5p与Atg7具有基因相关性。过表达miR-138-5p可抑制肝细胞内Atg7表达,而抑制miR-138-5p可促进Atg7表达。使用Atg7特定干扰RNA抑制Atg7表达,可抑制自噬,并能促进肝细胞增殖。结论肝部分切除可诱导miR-138-5p表达升高,促进肝再生;miR-138-5p可通过靶向调控Atg7抑制肝细胞自噬,从而发挥促进肝细胞增殖和肝再生的作用。因此,miR-138-5p可抑制肝细胞自噬,促进肝部分切除后肝再生。在小鼠肝再生中,miR-138-5p可通过介导Atg7调节自噬,以减轻肝部分切除术后细胞自噬对于肝脏组织的损伤、促进肝再生,最终发挥肝保护作用。
【图文】：

细胞内,统计软件,单因素方差分析,内参

较阈值法进行定量分析，其计算方法为t目的基因 Ct内参，△△Ct=△Ct实验组-△Ct对照0 统计软件进行统计学分析处理。计量资验，多组间比较用单因素方差分析，P AML12 细胞内 miR-138-5p 表达情况养至浓度约 70%~80%，以 0~25ng/μl 不同30ng/μl）的 HGF 处理细胞，qRT-PCR 检 miR-138-5p 上调水平具有 HGF 的剂量依达水平越高（P＜0.05）。（见图 1）

肿瘤生物学,肝部分切除术,细胞周期进程,肝脏疾病

2. 70%PH 后不同时间点小鼠肝组织内 miR-138-5p 表达一种具有显著自我再生能力的器官，在肝部分切除术（啮齿动物的肝再生已成为研究再生器官生长的典型模型慢性肝病、PH 术后肝功能不全、劈裂式肝移植和活体肝iRNA 是一类具有 19~24 个核苷酸的小非编码 RNA，能负表达；已发现超过 2500 种人类 miRNA 在各种生理和病，，如胚胎发育、细胞增殖分化、细胞周期进程、细胞凋新陈代谢等[18]。miRNA 在肿瘤生物学中的作用已被广泛iRNA 与肝细胞癌（HCC）有关，例如 miR-372、miR-10 miR-452 在 HCC 肿瘤中表达上调，而 miR-200、miR-141、miR-199a 和 miR-199b 表达下调[19-20]。肝癌组织、血清和A 异常表达，因此有望用于监测多种类型肝脏疾病，如病
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575

【相似文献】