pGC-FU-存活素慢病毒表达质粒的构建

发布时间：2020-06-13 01:25

【摘要】：目的构建pGC-FU-survivin慢病毒质粒,旨在下一步实验中利用survivin蛋白的表达影响原代肝细胞的增殖。方法从高表达survivin的小鼠淋巴瘤细胞株YAC-I中获取存活素(survivin)基因,连接到pcDNA3.1(+)质粒上,双酶切及双向测序鉴定。构建pGC-FU-survivin慢病毒载体,从基因水平和蛋白质水平鉴定含有survivin的目的片段表达。经包装、纯化,获得效价较高的病毒颗粒进行下一步生物学功能研究。结果双酶切及测序证实从YAC-I中获得的survivin基因连接到pcDNA3.1(+)质粒上,除第317位碱基由腺苷酸突变为胸腺嘧啶外,其余均与NCBI基因文库中survivin基因切合,该突变不影响蛋白质空间结构及蛋白质生理功能。构建pGC-FU-survivin表达质粒的阳性克隆菌株转染293T细胞后,荧光显微镜下观察可见绿色荧光,Western blot结果见一与标准品大小相同的条带。在293T细胞中进行病毒包装,最终纯化出pGC-FU-survivin慢病毒颗粒。结论借助T载体及pcDNA3.1(+)质粒,成功地在pGC-FU慢病毒表达质粒上建立了pGC-FU-survivin慢病毒表达质粒。

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 张瑞;郭善禹;;肝脏功能重建的细胞来源[J];世界华人消化杂志;2007年11期

【共引文献】

相关会议论文 前1条

1 聂广;;从“毒损肝络”假说到肝病辨证体系的重构[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年

相关硕士学位论文 前3条

1 张明;胞外蛋白酶抑制剂基因expi对大鼠肝再生的作用研究[D];河南师范大学;2010年

2 高斯媛;pGC-FU-存活素慢病毒表达质粒的构建[D];华中科技大学;2010年

3 高源;肝切除术后血清转氨酶变化影响因素的临床研究[D];青岛大学;2009年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 李绍青;管利东;王韫芳;白慈贤;岳慧敏;闫舫;南雪;施双双;司徒镇强;裴雪涛;;人脂肪来源的干细胞体外培养特性及分化为肝细胞样细胞的研究[J];自然科学进展;2006年04期

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 马巧玉，，张永明;急性重型病毒性肝炎22例临床观察[J];解放军医学杂志;1996年03期

2 赵文利,孔祥英,刘力健;李斯特菌病并免疫性肝功能衰竭、肝性脑病抢救成功1例[J];第三军医大学学报;2001年04期

3 管彩霞;;乙型肝炎病毒感染所致肝功能衰竭的实验室指标对临床预后的分析[J];山西医药杂志;2010年08期

4 陈波;;异甘草酸镁治疗病毒性肝炎180例临床观察[J];交通医学;2010年05期

5 张晓红,马会慧,崇雨田,肖杰生,姚集鲁;慢性乙肝患者停用拉米夫定后出现肝功能衰竭的危险因素[J];中山大学学报(医学科学版);2005年03期

6 古烈元;利福平与异烟肼合用治疗肺结核发生肝功能衰竭1例死亡的教训[J];广东医学院学报;1994年03期

7 韩德五;肠源性内毒素血症与肝功能衰竭[J];临床肝胆病杂志;1996年01期

8 崔建军;周伯平;戴炜;;拉米夫定阻断慢性乙型肝炎进展的临床对照研究[J];中华肝脏病杂志;2006年04期

9 李保森;邹正升;张伟;赵军;常彬霞;唐彦;尚丽丹;;215例急性和亚急性重型肝炎临床特征对比性分析[J];中华实验和临床病毒学杂志;2006年03期

10 ;简讯[J];国外医学情报;1990年06期

相关会议论文 前10条

1 ;Association of special skin lesion due to hot resistant Trichophyton rubrum and its variation in molecular biology[A];Final Program Abstracts & Papers Book of International Forum 2003 Academic Conference of Dermatology of the Integration of TCM with Western Medicine[C];2003年

2 孔祥平;任向荣;;RNA干扰抑制乙型肝炎病毒的研究进展[A];2006年慢性乙型肝炎治疗进展研讨会资料汇编[C];2006年

3 吴金明;黄智铭;吴建胜;陈向荣;林菊生;;MxA基因真核表达载体构建及体外抗HBV作用研究[A];浙江省中西医结合学会消化专业第八次学术年会暨省中西医结合消化系疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年

4 鞠瑛;侯楠;张晓宁;赵地;刘莹;朱法良;高立芬;马春红;;慢性乙型肝炎患者NK细胞中TIM-3的表达及其作用研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

5 朱函坪;姚苹苹;徐芳;翁景清;谢荣辉;朱智勇;;汉坦病毒Z10株N蛋白的表达及其在HFRS早期诊断中的应用[A];2006年浙江省感染病、肝病学术会议论文汇编[C];2006年

6 温志立;杨铁一;付唆林;徐铿;谭德明;;HBV基因型与乙型病毒性肝炎发病机制关系的初步研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

7 雷艳君;高晨;安润;陈建明;石琦;姜慧英;韩俊;董小平;;一种新的HPV的检测方法及巨大疣患者感染的HPV-2变异株启动子活性的研究[A];第七届全国病毒学学术研讨会暨第二届武汉现代病毒学国际研讨会论文集[C];2007年

8 樊和斌;杨东亮;;中国旱獭Ⅰ型干扰素受体的克隆及其功能的初步研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

9 郑煜煌;张春迎;何艳;李慧;谌资;刘猛;周华英;刘纯;李靖;尹伟;袁宏丽;;不同变异位点的HIV-1 vpr重组真核表达载体对转染细胞凋亡作用的观察[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年

10 刘琴;;59例重型病毒性肝炎心电图分析[A];2002全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2002年

相关重要报纸文章 前7条

1 高国起;乙肝基因治疗研究获进展[N];中国医药报;2006年

2 程书权;关注拉米夫定的不良反应[N];健康报;2003年

3 美讯;美调查显示应加强对丙肝的认识[N];医药经济报;2003年

4 本报记者 王峰;乙肝用药 适可而止[N];中国消费者报;2001年

5 本报记者 杨锐;丙肝：危害不亚于乙肝[N];健康时报;2003年

6 ;猪肝细胞型生物人工肝治疗后猪逆转录病毒感染人体的追踪观察[N];中国医药报;2003年

7 孙静媛;乙肝病人防止重叠感染戊肝病毒[N];健康报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 尹光文;尖锐湿疣组织中survivin、bax、caspase-3和端粒酶逆转录酶的表达及其与细胞凋亡、临床预后关系研究[D];郑州大学;2006年

2 赵艳丰;鸭乙型肝炎病毒感染鸭原代肝细胞差异蛋白质组分析及鸭Annexin A2在DHBV感染中作用的初步研究[D];复旦大学;2009年

3 应松成;胞嘧啶脱氨酶APOBEC3G和APOBEC3F抗病毒调控机制的研究[D];浙江大学;2007年

4 吕丽萍;hTERT修饰的成人肝细胞及其对肝炎病毒易感性的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年

5 洪梅;艾滋病的靶向基因治疗[D];中国协和医科大学;2000年

6 郜玉峰;外源性microRNA阻断HBV和HBV复制相关的宿主基因表达对HBV复制水平的影响[D];安徽医科大学;2008年

7 王洪武;双阴性T细胞在小鼠病毒性暴发型肝炎中的作用研究[D];华中科技大学;2009年

8 鞠瑛;Tim-3在HBV慢性感染中的表达及作用研究[D];山东大学;2009年

9 虞瑛姿;胞嘧啶脱氨酶APOBEC3DE和APOBEC3B对乙型肝炎病毒抑制研究[D];浙江大学;2011年

10 刘水平;HCV 5'NCR和NS3丝氨酸蛋白酶蛋白酶共调控SEAP表达的细胞模型的建立及初步应用[D];中南大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 高斯媛;pGC-FU-存活素慢病毒表达质粒的构建[D];华中科技大学;2010年

2 许向前;Livin、Survivin和Fas在尖锐湿疣组织中表达及相互关系研究[D];暨南大学;2009年

3 陈豪;乙肝病毒X基因（HBVX）慢病毒载体的构建和鉴定[D];福建医科大学;2011年

4 李t熑

本文编号：2710413