CTGF和TIMP-1shRNA对肝纤维化大鼠的影响

发布时间：2020-06-14 05:42

【摘要】：目的：研究结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor，CTGF）和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（Tissue inhibitor of metalloproteinase-1，，TIMP-1）短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）转录质粒重组体对肝纤维化大鼠肝脏组织CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-ⅢmRNA基因转录及CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白表达情况的影响，探索抗肝纤维化的机制，为肝纤维化的基因治疗探索新思路。方法：50只清洁级Wistar雄性大鼠被随机分为A组：双重RNA干扰组；B组：CTGF干扰组；C组：TIMP-1干扰组；D组：空载质粒治疗对照组；E组：模型对照组。每组大鼠腹腔注射1％DMN溶液，每次注射80μl／100g，每周连续注射3次，共3周。从第3周末开始尾静脉高压注射质粒干扰：A组注射psiRNA-GFP-Com（含有CTGF和TIMP-1)，B组注射psiRNA-GFP-CTGF，C组：注射psiRNA-GFP-TIMP-1，D组注射空载质粒psiRNA-DUO-GFPzeo，E组：不注射。每2周注射1次，共4次。所有大鼠于实验第12周末处死，收集肝组织备用。各组肝脏组织中性甲醛固定后HE染色检测肝组织病理形态学改变，免疫组织化学检测各组肝组织中CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白表达情况。抽提各组肝脏组织RNA并逆转录成cDNA通过荧光定量PCR检测各组肝脏组织的CTGF mRNA、TIMP-1mRNA、Col-Ⅰ mRNA及Col-Ⅲ mRNA的转录情况。结果：与模型对照组（E组）相比，空载质粒治疗组（D组）CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ mRNA及肝脏组织中的CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白的表达均无差异，A组、B组、C组CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ mRNA的转录降低，肝脏组织中CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ蛋白的含量减少，其中双重RNA干扰组psiRNA-GFP Com质粒转染（A组）肝纤维化大鼠后其对Col-Ⅰ mRNA的转录及肝组织中Ⅰ型胶原的蛋白含量的抑制程度优于单干扰组质粒转染（P＜0.01或P＜0.05）。结论：1.针对CTGF和/或TIMP-1的RNA干扰可明显抑制肝纤维化大鼠的CTGF、TIMP-1、Col-Ⅰ及Col-Ⅲ基因表达及相关蛋白的分泌。2.双重联合RNA干扰作为抗肝纤维化基因治疗的方法，其治疗效果可能会优于单个RNA干扰。 【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.2

【图文】：

图 1-1 DNA 浓度和纯度示意图 图 1-2 DNA 浓度和纯度示意图Fig1-1 & Fig1-2 The concentration and purity determine of DNA2 N-二甲基亚硝胺（DMN）诱导大鼠肝纤维化模型建立2.1 大鼠一般情况实验前各组大鼠进食正常，体毛有光泽，活动可，反应好，大、小便正常。大鼠在实验一周后，出现体毛无光泽，体重增长缓慢；实验两周后出现活动减少，尿黄，便溏；实验三周后，有14只大鼠出现死亡，死亡率为28％。2.2 取肝脏组织行HE染色，镜下可见肝细胞变性、坏死，窦周纤维化，汇管区纤维化扩大，小叶间有纤维间隔（图2），证实DMN（N-二甲基亚

图 1-1 DNA 浓度和纯度示意图 图 1-2 DNA 浓度和纯度示意图Fig1-1 & Fig1-2 The concentration and purity determine of DNA2 N-二甲基亚硝胺（DMN）诱导大鼠肝纤维化模型建立2.1 大鼠一般情况实验前各组大鼠进食正常，体毛有光泽，活动可，反应好，大、小便正常。大鼠在实验一周后，出现体毛无光泽，体重增长缓慢；实验两周后出现活动减少，尿黄，便溏；实验三周后，有14只大鼠出现死亡，死亡率为28％。2.2 取肝脏组织行HE染色，镜下可见肝细胞变性、坏死，窦周纤维化，汇管区纤维化扩大，小叶间有纤维间隔（图2），证实DMN（N-二甲基亚

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本文编号：2712373