当前位置:主页 > 医学论文 > 消化疾病论文 >

肠易激综合征血清microRNA表达谱的鉴定与功能分析

发布时间:2020-06-15 01:44
【摘要】:目的: IBS(肠易激综合征)是临床上常见的一种功能紊乱性肠道疾病,其病因及发病机制至今尚未完全阐明,缺乏特异性的形态学改变及生化异常。本研究通过miRNA基因芯片技术分析比较IBS患者和正常人血清miRNA表达以寻找IBS的血清miRNA表达谱,通过实时定量PCR与生物信息学分析,达到对IBS血清miRNA表达谱的鉴定与功能分析的目的,为今后进一步研究IBS的miRNA调控机制及分子诊断工具奠定分子基础。 方法: (1)miRNA基因芯片检测:miRNA基因芯片检测便秘型IBS、腹泻型IBS、正常人混合血清标本,以寻找差异表达的miRNA。 (2)miRNA生物信息学分析:基于差异表达的miRNA,在TargetScan6.0数据库中进行预测,得到差异miRNA调控的所有靶基因,基于NovelBio数据库进行GO注释和Pathway注释,得到基因参与的所有GO和PathwayTerm,采用Fisher检验计算每个GO和Pathway Term的显著性水平,从而筛选出差异基因富集的显著性GO和Pathway Term。分别将各组关注的显著性GO和显著性Pathway所对应的基因提取出来,用提取出的各类基因与其所对应的miRNA分别构建miRNA-靶基因网络。 (3)实时定量PCR分析:经生物信息学分析得到在IBS中起核心调控作用的miRNA,采用实时定量PCR分析血清标本中这些miRNA的表达,最后与miRNA基因芯片结果相比较。 研究结果: (1)血清miRNA表达谱 基因芯片结果通过Limma算法筛选差异表达的miRNA。与正常人相比,便秘型IBS患者14个血清miRNA存在显著性表达差异,腹泻型IBS患者24个血清miRNA存在显著性表达差异,便秘型IBS和腹泻型IBS患者均表达hsa-miR-449a、hsa-miR-210、hsa-miRPlus-I181b-2*(表3.2)。 (2)miRNA生物信息学分析 通过生物信息学分析,我们获得3组与IBS相关的显著性GO(便秘型IBS相关-神经改变GO,信号通路GO,生化GO)、(腹泻型IBS相关-神经改变GO,信号通路GO,生化GO)及(便秘型IBS组-腹泻型IBS组共有的差异miRNA相关-神经发育与疼痛GO,细胞运动GO,生化GO)(附录A)。用以上显著性GO对应的各类基因与其所对应的miRNA分别构建miRNA-靶基因网络(图3.3),得到网络中起核心调控作用的miRNA(表3.3)和被miRNA调控的关键靶基因。 (3)实时定量PCR验证miRNA miRNA-靶基因网络中起核心调控作用的miRNA行实时定量PCR分析(图3.4和表3.4,图3.5和表3.5,图3.6和表3.6),实时定量PCR结果显示miRNA表达趋势与基因芯片分析结果一致(图3.7,图3.8,图3.9)。 结论: (1)经基因芯片及生物信息学分析发现了与IBS关系密切的血清miRNA表达谱。便秘型IBS组表达上调较显著的miRNA为hsa-miR-3130-3p、hsa-miR-30c、hsa-miR-555,表达下调较显著的miRNA为hsa-miR-210、hsa-miR-499a、hsa-miR-4289;腹泻型IBS组表达上调较显著的miRNA为hsa-miR-484、hsa-miR-3170、hsa-miR-335,表达下调较显著的miRNA为hsa-miR-188-5p、hsa-miR-196a、hsa-miR-500a;两组共同表达hsa-miR-210、hsa-miR-499a。 (2)通过定量PCR验证了miRNA表达与miRNA基因芯片结果一致,证明miRNA基因芯片结果是可靠的。 (3)特定的血清miRNA表达谱可能为诊断IBS提供一种新的非侵入性生物标志。 (4)IBS患者相关miRNA可能通过神经系统、生化、细胞运动相关的多个靶基因和信号通路调节脑肠轴的变化、内脏敏感性、肠道分泌功能及肠道平滑肌动力而参与IBS发病。
【学位授予单位】:南昌大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R574
【图文】:

热图,红色


便秘型IBS组、腹泻型IBS组、正常对照组间miRNA表达的热图

分析结果图,对照组,统计学意义,显著性差异


图 3.4 便秘型 IBS组 VS 对照组 miRNA实时定量 PCR 分析结果表 3.4 便秘型 IBS组 VS 对照组 miRNA实时定量 PCR 分析结果miRNA 名称 正常组平均 2-"

本文编号:2713697

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/2713697.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户c9fa2***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com