溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜Flt3和Flt3L表达的研究

发布时间：2020-06-19 12:17

【摘要】：目的：溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis, UC)是炎症性肠病(Inflammatory BowelDisease, IBD)的一种，该疾病主要侵及黏膜层和黏膜下层，其病因尚不十分清楚。近年来,肠黏膜中的树突状细胞（dendritic cell，DC）和调节性T细胞（regulatory Tcell, T reg）的作用是学者们研究的热点。现有的观点认为DC和T reg之间的免疫调节在溃疡性结肠炎的炎症反应过程中起重要作用，并认为Fms样络氨酸激酶3（Fms-like tyrosine kinase3，Flt3）及其配体（Flt3ligand，Flt3L）参与了UC炎症反应过程中DC和T reg之间的调节。因此本研究采用小鼠溃疡性结肠炎模型，观察小鼠溃疡性结肠炎模型组与正常组小鼠的一般状态、疾病活动指数、光镜下观察HE染色病理变化和结肠黏膜损伤情况，并从细胞水平检测小鼠结肠黏膜DC和T reg的表达，从基因水平和蛋白水平检测Flt3和Flt3L的表达，探讨DC和T reg及相关因子Flt3和Flt3L在溃疡性结肠炎发生、发展中所起的作用，为临床UC的治疗打下理论基础。方法：采用葡聚糖硫酸钠（DSS）自饮法建立动物模型，BALB/c雄性小鼠20只，体重约25g，随机分为2组，每组10只。正常组：予饮用蒸馏水；模型组：予自饮50g/L DSS溶液7天，观察小鼠的一般状态、记录疾病活动指数(diseaseactivity index，DAI)，并于造模后第7天处死小鼠，记录结肠黏膜损伤指数(colonicmucosa damage index, CDMI)，光镜下观察HE染色小鼠结肠黏膜病理学改变，流式细胞学技术检测小鼠结肠黏膜DC、T reg在细胞水平的表达变化，免疫组织化学染色方法检测小鼠结肠黏膜Flt3在蛋白水平的表达变化，ELISA方法检测小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表达变化，实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）方法检测小鼠结肠黏膜Flt3/Flt3L在基因水平的表达变化。结果： 1．模型组小鼠DAI评分3.15±0.28、CMDI评分2.44±0.24与正常组DAI评分0.00±0.00、CMDI评分0.00±0.00比较均明显升高，差异性显著(P0.05)，提示小鼠溃疡性结肠炎模型成功。 2．模型组小鼠结肠黏膜中DC占细胞百分率0.19±0.18%、 T reg占CD4+T的百分率4.11±2.14%与正常组小鼠结肠黏膜中DC占细胞百分率2.83±1.52%、 Treg占CD4+T的百分率14.02±1.73%比较均明显降低，有显著性差异(P0.05)。 3．模型组小鼠结肠黏膜中Flt3在蛋白水平上的表达量82.19±5.34较正常组Flt3的表达量31.66±2.31明显降低，有显著性差异(P0.05)。 4．模型组小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表达量为36.25±6.34pg/ml较正常组Flt3L表达量57.24±5.97pg/ml明显降低，有显著性差异(P0.05)。 5．模型组小鼠结肠黏膜中Flt3mRNA的表达量0.53±0.06、Flt3LmRNA的表达量0.10±0.18较正常组Flt3mRNA的表达量1.01±0.13、Flt3LmRNA的表达量1.01±0.25比较均明显降低，有显著性差异(P0.05)。结论：在DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型中DC和T reg之间存在免疫调节失衡，而导致该失衡的原因是Flt3和Flt3L在DC和T reg之间所发挥的桥梁作用受损，最终导致溃疡性结肠炎的发生。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R574.62
【图文】：

结肠,血管纹,溃疡,水肿

3.流式细胞学检测结果3.1 小鼠结肠黏膜组织中 DC 占黏膜细胞百分率的情况（见表 6、图 3）模型组 DC 占黏膜细胞百分率明显低于正常组，差异性显著( P<0.05)。表 6：两组小鼠结肠黏膜中 DC 占黏膜细胞的百分率情况(x±s) %注：模型组与正常组比较 P<0.05组别 N DC (x±s) %正常组 9 2.83±1.52模型组 9 0.19±0.185图 1 结肠模型组结肠较正常组缩短，扭曲变形，结肠表面粗糙，可见细颗粒状，直肠粘膜充血。图 2 结肠正常组结肠粘膜光滑，无充血水肿，模型组可见血管纹理增粗，充血糜烂，溃疡灶。

黏膜,百分率,水肿

图 4：小鼠结肠黏膜中 T reg 占 CD4+T 的百分率况(x±s) %4. 光镜下 HE 染色病理形态观察结果：正常组：小鼠结肠黏膜完整，层次分明，腺体完整，排列整齐，无炎性细胞和充血水肿等。模型组：小鼠结肠黏膜不完整各层组织结构消失，可见典型溃疡灶，大者浸度可达固有层，伴有明显的充血、水肿、糜烂等，有大量炎性细胞浸润，杯胞减少，甚至丢失。（见图 5、图 6、图 7、图 8）

【参考文献】