静脉移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布

发布时间：2020-06-24 17:59

【摘要】： 目的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能[1],在机体组织损伤修复过程及细胞移植治疗等多个领域有广阔的应用前景。随着BMSCs用于组织修复和基因治疗的研究,体内以及体外培养扩增的BMSC的定向募集迁移潜能引起人们的关注。本实验将分离、培养、扩增、荧光标记大鼠BMSCs,经静脉移植入溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠,拟探讨移植细胞浓度、以及硝普钠对BMSCs归巢到结肠的影响。为BMSCs在消化管组织工程以及肠黏膜损伤性疾病治疗研究中的应用,提供基础理论和实验依据。 第一部分骨髓间充质干细胞的生物学特性 1.取4-6w SD大鼠骨髓细胞,分离、培养、扩增获取BMSCs。流式细胞仪检测第3和第5代(P3和P5)BMSCs的免疫表型。结果:分离、培养原代细胞3～12d,细胞数量迅速增多,具有典型的长梭状的形态及漩涡状排列的特征。流式细胞仪分析P3和P5细胞表面标记物CD44、CD90为阳性,CD45为阴性。表达CD44、CD90的均一性分别为98.26±0.48%及98.68±0.32%。 2.取P3大鼠BMSCs用1μmoL/L的地塞米松、0.5 mmoL/L的3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、10 mg/L的胰岛素、100mmoL/L的吲哚美辛(indomethncin)和10%FBS的H-DMEM诱导培养。诱导第3d起光镜下可见细胞变为圆形或椭圆形,胞质有脂滴。诱导第10d,油红O染色脂滴呈橘红色;对照组仍为长梭形,无脂滴出现。另用含地塞米松0.1μmol/L、β-甘油磷酸钠10mmol/L、维生素C 50mg/L和10%FBS的L-DMEM的条件培养液定向诱导P3细胞向成骨细胞分化。从诱导第2d开始,部分细胞由长梭形逐渐变为立方形,进而转变为多角形,培养第8d时,大多数细胞转变为多角形,19d左右出现钙化结节,茜素红染色呈橘红色;对照组细胞仍为长梭形,未见钙结节形成。 第二部分静脉移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布 1. SD大鼠30只随机分为A、B、C组,以免疫+TNBS/乙醇复合法建立UC模型。制备DAPI荧光标记的P3～P5-BMSCs悬液备用。模型制备完成后24 h内,3组大鼠均经尾静脉注射1mL分别含1×106、5×106、1×107的DAPI标记的BMSCs。移植后第7、14 d各处死5只大鼠,取结肠做恒冷切片,荧光显微镜下计数各组DAPI标记BMSCs在溃疡部位和正常部位的细胞数。相同切片再经HE染色,观察形态。结果:移植后第7、14 d,各组大鼠结肠均见蓝色荧光标记的BMSCs,主要分布于黏膜层及黏膜下层,偶见于肌层及外膜。统计结果显示:移植第7、14 d各组溃疡部位阳性细胞数明显高于正常部位阳性细胞数(F=65.17,P0.01);移植第7d,B组溃疡及正常部位的细胞数均高于A组(F=13.06,P 0.05),B组与C组差异不显著。 2. SD大鼠20只随机分为D、E组,同样方法建立UC模型。制备DAPI荧光标记的P3～P5 BMSCs悬液备用。模型制备完成后24 h内,2组大鼠均经尾静脉注射1mL含5×106荧光标记的BMSCs悬液,E组同时加入含0.2mg/kg体重的硝普钠。移植后第7、14 d每组各处死5只大鼠,取结肠观察计数各组DAPI标记BMSCs在结肠溃疡部位和正常部位的细胞数。相同切片再经HE染色,观察形态。结果:移植后第7、14 d,荧光标记的BMSCs在D、E组UC大鼠结肠的主要分布同A、B、C组。移植第7、14 d各组溃疡部位阳性细胞数明显高于正常部位阳性细胞数(F=354.54,P 0.01);移植第7 d,E组溃疡处的细胞数均高于D组(F=15.00,P 0.05);第7d和14d,E组正常部位的细胞数均高于D组(F=23.12,P 0.05)。 全文结论 1.用贴壁筛选法,成功分离得到大鼠BMSCs,流式细胞仪分析培养的P3、P5-BMSCs具有MSCs的表面标记特征。 2.所获P3-BMSCs在体外可诱导分化为成骨细胞或者脂肪细胞,证明所分离的BMSCs具有多向分化的能力。 3.移植第7、14 d,各组结肠溃疡部位荧光标记的BMSCs细胞数明显高于非病变部位,这提示病损的组织和器官对BMSCs可能有特异的趋化作用。 4. 3种剂量BMSCs经静脉移植入UC大鼠后在其结肠分布的统计结果显示,并非移植细胞数量越多,迁移到结肠损伤部位的细胞就越多,最适移植细胞数量为5×106个。 5.单纯移植BMSCs与联合硝普钠移植BMSCs比较,前者迁移到结肠的BMSCs数明显低于后者。表明移植细胞同时给与硝普钠能促进BMSCs向结肠的迁移。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R574.6

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李红;王汝俊;杜群;王文君;李燕舞;巫燕莉;王建华;;溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜TLR2蛋白水平的影响[J];中药新药与临床药理;2008年02期

2 李红;杜群;王汝俊;王建华;李燕舞;巫燕莉;;溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜IκB-α蛋白表达的作用[J];辽宁中医杂志;2008年07期

3 李红;杜群;王汝俊;王文君;李燕舞;巫燕莉;;溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜NF-КB DNA结合活性的作用[J];世界华人消化杂志;2008年06期

4 陈英群;董福轮;马贵同;;三硝基苯磺酸诱导大鼠溃疡性结肠炎的实验研究[J];同济大学学报(医学版);2006年06期

5 杜群;李红;王汝俊;李燕舞;巫燕莉;王建华;;溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜IKK-α蛋白表达的作用[J];中药材;2008年07期

6 宋宁;李燕舞;巫燕莉;王汝俊;;溃结灵对UC大鼠结肠黏膜pERK1/2、pMEK1/2蛋白水平的影响[J];中药新药与临床药理;2010年02期

7 邱明义,范恒,梅家俊,沈关心,刘松林,赵映前;理肠四方对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织TNF-αmRNA表达的影响[J];世界华人消化杂志;2004年03期

8 周宁;王静;高鲁霞;徐明婧;张惠云;;结肠清颗粒对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠病理改变的影响[J];山东中医杂志;2010年06期

9 范恒,邱明义,户菲菲,梅家俊,沈关心,刘松林;理肠四方对溃疡性结肠炎大鼠血液黏附分子CD44、CD54的影响[J];世界华人消化杂志;2005年03期

10 崔淑云;张恒弼;孙国才;吴传真;白梅;赵卫平;徐彤;李杰;钟湘丽;张丽;陈维刚;;补脾散治疗溃疡性结肠炎的临床与实验研究[J];沈阳部队医药;1995年02期

相关会议论文 前10条

1 杜旦峰;;醉鱼草子对大鼠溃疡性结肠炎的作用研究[A];中华中医药学会第二十二届全国脾胃病学术交流会暨2010年脾胃病诊疗新进展学习班论文汇编[C];2010年

2 李红;杜群;王文君;王汝俊;王建华;刘珊珊;;溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜Toll样受体2、4基因表达的影响[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年

3 于海食;洪缨;董事分;陈浩;万雪梅;;肠安康新组方不同给药途径对三硝基苯磺酸诱导溃疡性结肠炎大鼠的影响及有关机制初探[A];中华中医药学会中药实验药理分会第八届学术会议论文摘要汇编[C];2009年

4 郭敏;王静;李楠;翁艳;贾志伟;王法成;;溃疡性结肠炎大鼠CD~4+CD25~+T细胞的改变[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

5 景姗;王新月;杨雪;杨舒;;溃疡性结肠炎大鼠肺、肠组织中SP-A转录与表达状况及中药的干预中用[A];第二十三届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2011年

6 柯希权;王启之;徐希岳;燕善军;;溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜中MMP-3和PPAR-γ表达及其意义[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（下册）[C];2007年

7 李忠海;叶祚栋;何永恒;;中西医结合治疗溃疡性结肠炎临床观察[A];大肠肛门病论文汇编[C];2001年

8 王志坤;张晓利;王艳玲;苏晓兰;刘启泉;;兰茵凤扬化浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠核因子-κB抑制蛋白的影响[A];中华中医药学会第二十二届全国脾胃病学术交流会暨2010年脾胃病诊疗新进展学习班论文汇编[C];2010年

9 苏春芝;;健脾清肠汤治疗溃疡性结肠炎疗效观察[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年

10 王新月;张雯;孙慧怡;吴健;王建云;刘大铭;;溃疡性结肠炎临床流行病学及肺功能损伤特点[A];第二十三届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2011年

相关重要报纸文章 前10条

1 同济医院 姜元喜 许树长 副主任医师;溃疡性结肠炎饮食预防是关键[N];上海中医药报;2008年

2 长春鹏程胃肠医院院长、主任医师 徐子鹏;溃疡性结肠炎的治疗[N];健康报;2009年

3 刘元庆 长春玛莉娅女子医院副主任医师 贾占波 山东东营胜利石油管理局肛肠病防治院 苏海燕 呼伦贝尔市中蒙医院;中医治儿童溃疡性结肠炎有法[N];中国中医药报;2009年

4 南昌大学第二附属医院 何楠;谨防老年溃疡性结肠炎癌变[N];家庭医生报;2009年

5 袁虎;患溃疡性结肠炎要重调养[N];医药养生保健报;2009年

6 记者 王建影　通讯员 黄文秋;我国溃疡性结肠炎呈高发态势[N];健康报;2010年

7 湖北省武汉市武昌医院南湖分院 陈继英;中西医结合治溃疡性结肠炎[N];中国中医药报;2010年

8 本报记者 慕欣　王雪敏 魏平;溃疡性结肠炎：要诊断 先排查[N];医药经济报;2011年

9 山西临汾市尧都区中西医结合医科医院 周丽;溃疡性结肠炎,六辨施治[N];医药经济报;2011年

10 本报记者 魏平;激素治疗溃疡性结肠炎：不同情况不同选择[N];医药经济报;2011年

相关博士学位论文 前10条

1 王建枫;锌对大鼠肝脏硬脂酰辅酶A去饱和酶-1（SCD-1）的影响及其调控机理研究[D];浙江大学;2008年

2 周春雷;五肽化合物PLNPK对大鼠抗GBM肾炎的治疗作用及其作用机制的研究[D];天津医科大学;2008年

3 云宇;缺血后处理抗大鼠肾缺血—再灌注损伤的作用机制研究[D];昆明医学院;2010年

4 刘明;梓醇对脑缺血损伤大鼠恢复早期神经功能的影响及其机制研究[D];北京中医药大学;2011年

5 沙莹;粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠的治疗及其作用机制的研究[D];吉林大学;2010年

6 李国;白介素-6中和抗体及索拉菲尼对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的作用及其机制[D];中国协和医科大学;2009年

7 莫雪安;同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠模型的实验研究[D];广西医科大学;2011年

8 邹彬;电刺激干预对废用性肌萎缩大鼠线粒体生物合成和呼吸功能的影响[D];北京体育大学;2011年

9 孙凤平;参芪复方对GK大鼠肾脏NF-κB及PPARγ的影响[D];成都中医药大学;2011年

10 陈笛;藁苯内酯对大鼠蛛网膜下腔出血的神经保护作用及其机制的研究[D];重庆医科大学;2011年

相关硕士学位论文 前10条

1 陈晓云;静脉移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布[D];重庆医科大学;2010年

2 范燕云;实验性溃疡性结肠炎大鼠肠壁胶原纤维和骨桥蛋白表达变化及相关药物的影响[D];福建医科大学;2010年

3 汪建超;溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜中MMP-3和NF-κBp65表达及其意义[D];安徽医科大学;2008年

4 李骏豪;黄连木香配伍对溃疡性结肠炎大鼠模型干预作用及相关机制研究[D];成都中医药大学;2011年

5 徐艳华;骨髓间充质干细胞移植对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用[D];重庆医科大学;2011年

6 雒福东;血竭治疗活动期溃疡性结肠炎的实验及临床研究[D];成都中医药大学;2011年

7 郑子春;清肠化湿法治疗溃疡性结肠炎活动期临床疗效观察及实验研究[D];南京中医药大学;2010年

8 李俊;溃疡性结肠炎患者脾虚证肠粘膜线粒体体视学研究[D];广州中医药大学;2010年

9 王晓锋;荆芥、防风在溃疡性结肠炎治疗方药中的增效作用临床观察[D];北京中医药大学;2011年

10 武良琴;地衣芽孢杆菌对小鼠急性溃疡性结肠炎作用的实验研究[D];浙江大学;2010年

本文编号：2728182