O-GlcNAc及其水解酶OGA在肝脏脂肪合成中的作用

发布时间：2020-07-01 02:49

【摘要】：目的:探讨O-GlcNAc糖基化及OGA在非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)肝脏脂肪代谢的作用机制。方法:1.免疫组化检测NAFLD标本中O-GlcNAc的表达,建立NAFLD细胞模型,Western Blot检测OGA和O-GlcNAc的表达。2.以过表达OGA的慢病毒转染L0_2细胞,获得过表达OGA的L0_2细胞;以OGA抑制剂PUGNAc作用L0_2细胞,获得低表达OGA的L0_2细胞;油红o染色检测OA刺激的各组细胞模型的脂肪生成能力,qRT-PCR及Western Blot检测SREBP1c及脂肪合成酶ACC1、FASN、SCD1的表达。3.免疫共沉淀和放线菌酮(cycloheximide,CHX)实验探究过表达OGA的L0_2细胞模型中OGA对SREBP1的调控作用。结果:1.20例健康对照组肝脏中,13例标本O-GlcNAc为弱表达,7例标本为强表达,60例NAFLD患者肝脏脂肪变中,11例标本O-GlcNAc为弱表达,49例标本为强表达。Spearman相关性分析r=0.441,P0.01,NAFLD细胞模型中,OGA、OGT蛋白和O-GlcNAc水平上升。均提示O-GlcNAc表达与NAFLD的脂肪代谢呈正相关。2.OGA过表达后L0_2细胞脂肪合成减少,OGA抑制后L0_2细胞脂肪合成增加。OGA过表达后L0_2细胞SREBP1c表达和脂肪合成酶ACC1、FASN、SCD1表达水平均下降,OGA抑制后L0_2细胞OGA、OGT、O-GlcNAc、SREBP1c表达和脂肪合成酶ACC1、FASN、SCD1表达水平均升高。3.免疫共沉淀结果提示OGA和SREBP1有相互作用,OGA过表达后,SREBP1糖基化水平降低;CHX实验显示,OGA过表达细胞中SREBP1c蛋白在8h降解,提示OGA影响SREBP1c蛋白稳定性。结论:O-GlcNAc糖基化与NAFLD疾病相关,其去糖酶OGA可以通过减少SREBP1c表达降低肝脏脂肪合成代谢。
【学位授予单位】：西安医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R575

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本文编号：2736192