急性坏死性胰腺炎肠黏膜损伤质粒示踪细菌易位实验研究

发布时间：2020-07-04 17:37

【摘要】：目的采用质粒示踪技术观察ANP大鼠不同时点肠黏膜损伤细菌易位,探讨肠黏膜损伤与细菌易位的相关性,为SAP肠源性感染评估及其防治提供理论依据和实验基础。 方法健康SD大鼠n=70,随机(抽签法)分成2组:ANP组(实验组,A组),n=40;SO组(假手术组,S组),n=30。A、S组大鼠再分别按3h、6h、12h、24h、36h时点随机分成5个亚组,A组大鼠各亚组n=8,S组大鼠各亚组n=6。A、S两组大鼠喂饲示踪菌PUC18质粒大肠杆DH-5α每天1次(10 ml/kg)×2d,于喂饲示踪菌第2天开始采集粪便标本×3d。将每次采集的粪便标本置放于含100μg/L氨苄青霉素的LB琼脂培养皿上培养,观察有耐药菌生长后即行细菌扩增、质粒提取、酶切及酶切产物电泳。细菌扩增质粒提取酶切产物与示踪质粒PUC18酶切产物电泳条带相同证实示踪菌已定植。确认示踪菌定植后,A组大鼠逆行胰胆管匀速泵入5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g,0.2ml/min)建立ANP模型,S组大鼠开腹仅翻动十二指肠建立SO模型。两组大鼠均在建模后按3h、6h、12h、24h、36h时点门静脉取血检测血AMY、Ca~(2+)、DAO、ET浓度;观察腹腔大体情况;切取小肠和胰腺组织HE染色行组织病理学检查并行组织病理学评分;肠系膜淋巴结、腹水、门脉血、胰腺组织进行细菌培养及示踪菌的鉴定。 结果(1)腹腔大体观察:A组大鼠随时点延长出现胰腺点片状出血、坏死,大片皂化斑,血性、淡红色腹水,胃肠胀气、扩张;S组大鼠各时点均未见上述改变。 (2)血AMY:A、S组大鼠比较:A组大鼠各时点血AMY浓度均高于S组各时点, P0.05。A组大鼠组间各时点比较:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h,P0.05;②A6h低于A12h、A36h, P0.05,A6h低于A24h,P0.05;③A12h低于A24h、A36h,P0.05;④A24h高于A36h,P0.05。S组大鼠组间各时点比较,无统计学差异,P0.05。 (3)血Ca~(2+):A、S组大鼠比较:A组大鼠各时点血Ca~(2+)浓度均低于S组各时点,P0.05。A组大鼠组间各时点比较:①A3h高于A6h,P0.05,A3h高于A12h、A24h、A36h,P0.05;②A6h高于A12h,P0.05,A6h高于A24h、A36h,P0.05;③A12h高于A24h、A36h,P0.05;④A24h高于A36h,P0.05。S组大鼠组间各时点比较,无统计学差异,P0.05。 (4)胰腺组织病理学检查(HE染色):A组大鼠:①A3h:胰腺组织轻度水肿,腺泡细胞轻度肿胀,点状出血,少量炎症细胞浸润,腺叶结构正常;②A6h:胰腺组织中度水肿,腺泡细胞肿胀明显,片状出血,较多炎症细胞浸润,腺叶结构轮廓尚清晰;③A12h:胰腺组织水肿明显,腺泡细胞肿胀明显,片状出血及少量坏死,大量炎症细胞浸润,部分腺叶正常结构消失;④A24h:胰腺组织水肿、出血及坏死明显,大量炎症细胞浸润,大部分腺叶正常结构消失;⑤A36h:胰腺组织大部分出血及坏死,大量炎症细胞浸润,腺叶正常结构基本消失。S组大鼠:胰腺组织未见上述病理改变。 (5)小肠组织病理学检查(HE染色):A组大鼠:①A3h:肠绒毛排列整齐,轻度水肿,无顶部上皮细胞脱落,肠上皮下间隙正常,少量炎性细胞浸润;②A6h:肠绒毛中度水肿,顶部上皮细胞一部分脱落,肠上皮下间隙扩大,较多炎性细胞浸润;③A12h:肠绒毛排列不整齐,水肿明显,顶部上皮细胞部分脱落,肠上皮下间隙扩大,大量炎性细胞浸润;④A24h:肠绒毛顶部上皮细胞大量坏死脱落,肠上皮下间隙明显扩大,大量炎性细胞侵润;⑤A36h:肠绒毛变短,排列不规则并两两融合,顶部上皮细胞大量坏死脱落、局灶性溃疡,肠上皮下间隙明显扩大,大量炎性细胞浸润。S组大鼠:小肠组织未见上述病理改变。 (6)胰腺组织病理学评分:A、S组大鼠比较:A组大鼠各时点评分均高于S组相应时点, P0.05。A组大鼠组间各时点比较:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h、A24h、A36h ,P0.05;③A12h低于A24h、A36h ,P0.05;④A24h低于A36h ,P0.05。S组大鼠组间各时点比较,无统计学差异,P 0.05。 (7)小肠组织病理学评分: A、S组大鼠比较:①A3h高于S3h, P0.05;②A6h、A12h、A24h、A36h均高于S组相应各时点,P0.05。A组大鼠组间各时点比较:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h、A24h、A36h ,P0.05;③A12h低于A24h、A36h ,P0.05;④A24h低于A36h , P0.05。S组大鼠组间各时点比较,无统计学差异,P0.05。 (8)血DAO浓度:A、S组大鼠比较:A3h高于S3h,P 0.05;A6h、A12h、A24h、A36h均高于S组同时点,P0.05。A组大鼠组间各时点比较:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h, P0.05,A6h低于A24h、A36h ,P0.05;③A12h低于A24h、A36h ,P0.05;④A24h低于A36h , P0.05。S组大鼠组间各时点比较,无统计学差异,P 0.05。 (9)血ET浓度:A、S组大鼠比较:A3h高于S3h,P 0.05;A6h、A12h、A24h、A36h均高于S组同时点,P0.05。A组大鼠组间各时点比较:①A3h低于A6h、A12h、A24h、A36h ,P0.05;②A6h低于A12h、A24h、A36h,P0.05;③A12h低于A24h、A36h,P0.05;④A24h低于A36h,P0.05。S组大鼠组间各时点比较,无统计学差异,P 0.05。 (10)细菌培养:A3h肠系膜淋巴结、腹水、门脉血、胰腺组织细菌培养均呈阴性结果;A6h肠系膜淋巴结细菌培养阳性,腹水、门脉血、胰腺组织培养为阴性;A12h肠系膜淋巴结、腹水细菌培养阳性,门脉血、胰腺组织培养为阴性;A24h、A36h肠系膜淋巴结、腹水、门脉血、胰腺组织细菌培养均呈阳性。S组大鼠各时点肠系膜淋巴结、腹水、门脉血、胰腺组织细菌培养均呈阴性。A组大鼠组间各时点肠系膜淋巴结、腹水、门脉血、胰腺组织细菌培养总阳性率比较:①A6h低于A12h,无显著性差异,A6h低于A24h、A36h,有显著性差异;②A12h低于A24h,无显著性差异,A12h低于A36h,有显著性差异;③A24h低于A36h,无显著性差异。 (11)相关性分析:①A组大鼠胰腺组织病理学评分与小肠组织病理学评分呈正相关关系,P0.05;②A组大鼠血浆DAO浓度与小肠组织病理学评分呈正相关关系,P0.05;③A组大鼠血浆ET浓度与小肠组织病理学评分呈正相关系, P0.05;④A组大鼠血浆DAO浓度与血浆ET浓度呈正相关关系,P0.05。 结论(1)大鼠ANP成模后6h出现肠黏膜损伤,损伤程度随时点延长加重,细菌易位率随时点延长升高。 (2)大鼠ANP成模后6h肠系膜淋巴结检出示踪菌,早于腹水及门脉血示踪菌检出时间。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R576
【图文】：

12h 4/8 3/8 0/8 0/8 32 21.875c24h 6/8 5/8 4/8 2/8 32 53.125d36h 8/8 6/8 6/8 5/8 32 78.1253h 0/8 0/8 0/8 0/8 24 06h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 012h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 024h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 036h 0/6 0/6 0/6 0/6 24 0A3h细菌培养阴性；)与A12h比较，P>0.00714； 2) 与A24h比较，P<0.00714；) 与A36h比较，P<0.00714；)与 A 24h 比较，P>0.00714；2) 与 A36h 比较,P<0.00714；)与 A36h 比较，P>0.00714；关性分析A 组大鼠胰腺组织病理学评分与小肠组织病理学评分进行相关性分析，呈正相关关系，相关系数 r=0.805， P<0.05。［图 7］

.3 A 组大鼠血浆 ET 浓度与小肠组织病理学评分进行相关分析，呈正相，相关系数 r=0.913，P<0.05。［图 9］图 8ANP 组大鼠血浆 DAO 浓度与小肠组织病理学评分散点图

【引证文献】

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1 黄硕;清胰汤对急性坏死性胰腺炎大鼠胃排空和小肠推进率的影响[D];南华大学;2012年

本文编号：2741379