慢性乙型肝炎患者NK细胞的特征及其与肝脏病变相关性的研究

发布时间：2020-07-09 08:37

【摘要】： 乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝性DNA病毒,病毒本身的复制并不造成肝脏损伤。研究表明,CHB患者肝脏损伤是由于免疫系统不能有效控制病毒复制,却又长期被激活并介导肝细胞破坏而发生的。近十年来,人们逐步开始认识到NK细胞在各类肝脏疾病发生发展过程中发挥了重要作用。然而,HBV慢性感染患者(特别是e抗原阳性的CHB患者)体内NK细胞的功能特点及其临床意义还未被揭示,NK细胞介导的肝损伤机制也未完全阐明。本研究通过横断面研究,系统观察HBV感染各个时期(包括急性肝炎、慢性HBV感染免疫耐受期和免疫活化期)患者外周血NK细胞的频率、表型和功能特点,并密切结合患者的临床指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平和血清HBV载量)进行分析,以期阐明NK细胞变化的临床意义,并在此基础上初步探讨了CHB患者NK细胞免疫活化的可能原因及其介导肝脏免疫损伤的作用机制。研究发现,与免疫耐受期患者和健康对照者比较,慢性乙肝免疫活化期患者外周血NK细胞亚群发生显著改变,表现为CD56~(dim)CD16~(pos)亚群频率下降而CD56~(bright)CD16~(neg)亚群频率上升。我们还发现尽管急性乙型肝炎病程早期阶段,患者的外周血T细胞和NK细胞表面的活化标志物如HLA-DR、CD38和CD69的表达显著上升,然而慢性乙肝免疫活化期患者的外周血仅NK细胞活化标志显著增加,提示慢乙肝免疫活化期以NK细胞活化为主。进一步的体外功能试验揭示免疫活化期患者NK细胞在IL-12／IL-15刺激后表达更多IFN-γK562刺激后产生更多CD107a,同时杀伤更多的靶细胞K562、HepG2、HepG2.2.15和HuH7.5细胞,更重要的是NK细胞杀伤活性与肝损伤程度密切相关。本研究通过对乙型肝炎患者NK细胞的表型和功能进行详细分析,发现慢性乙型肝炎免疫活化期患者外周血NK细胞处于高活化状态,进一步支持慢性乙型肝炎患者NK细胞的高度活化与肝损伤的严重程度密切相关。
【学位授予单位】：中国人民解放军军医进修学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R512.62
【图文】：

人类,受体,凝集素受体,细胞因子

型凝集素受体，但是表达低水平的KIRS受体，细胞杀伤活性和ADCC活性很低。同时还组成性表达大量的细胞因子和化学趋化受体，包括IL一2受体(IL一ZRap丫)，e一kit和CCR7(CCR7)。见图2。

外周血NK细胞,亚群,策略,NK细胞

过CD3和CD56分子圈门 CD3-CD56+，即NK细胞;在NK细胞的基础上，进一步通过en56和eD16分子区分℃Ds6州蜘(enl6尹创叮)和ens严(eol6+)NK细胞亚群。设门策略见图3。2228，26吟二二’ ’:’‘:.:::毓毓 ::: 000.94%...、、.…‘ ‘ lll...一一、必’ ’于于渭麟:’ ’▲，9..............叭OQ CD3.1-一.一------呻 CD16一---------呻图3外周血NK细胞亚群设门策略。左图框内为cD3℃D56+的细胞;右图框内分别为 CD56嘲和cDS严NK细胞亚群。3.检测NK细胞活化比例取新鲜分离的PBMCs各100闪，在样品中同时加入下列荧光标记抗体:anti一CD3一 FITC10林l，anti一eD56一ApCS林l。NK细胞活化标志物(eD38、CD69

流式细胞仪,内分,中位数,患者

患者(中位数4.3%，范围0.94%一5.8%;p<0.001)和健康对照组(中位数3.7%;范围0.5%一17.1%:p<0.001)明显上升。免疫耐受期患者和健康对照组在NK细胞各亚群的分布上无显著性差异。结果见图5、图6、图7和图8。………绷赚赚赚赚赚赚赚赚歉歉歉歉歉歉歉歉歉歉嚼嚼豢豢豢豢豢豢O哟00图5流式细胞仪在淋巴细胞门内分析PBMCs的CD3和CD56表达。框内点图表示健康对照组、IT、IA和AHB患者的NK细胞亚群。数值表示cD56bri咖和ens6d‘mNK细胞亚群的百分t匕。

【共引文献】