血吸虫病肝纤维化中HSP47的表达研究

发布时间：2020-07-12 15:17

【摘要】：【目的】 HSP47在器官纤维化形成过程中发挥着重要作用,能与多种类型胶原及前胶原肽特异性结合,辅助胶原蛋白的正确折叠,是前胶原正常加工、合成和分泌所需的分子伴侣,而HSP47与肝纤维化的研究目前尚处于探索阶段,尤其是在血吸虫虫卵肉芽肿的影响下,HSP47的表达及功能尚需进一步探讨。本实验旨在通过收集临床病例及建立小鼠模型,研究HSP47在慢性血吸虫病肝纤维化中的表达状况并探讨相关机制。【方法】 1.收集2008年～2010年间同济医院门诊和住院部的部分血吸虫病肝纤维化患者肝穿标本及临床资料(20例);另收集病理证实未发生肝纤维化者(5例)。肝组织行免疫组织化学和Real-time PCR检测HSP47的表达,此外行HE染色和Masson染色观察病理改变和胶原纤维沉积状况。 2.建立实验性血吸虫病肝纤维化小鼠模型:采用Balb/c小鼠,用血吸虫尾蚴经腹部皮肤感染,同时设正常对照组比较。感染后第12周时取小鼠肝脏,制作肝组织石蜡切片行HE及Masson染色,免疫组织化学和Real-time PCR反应检测HSP47的表达。【结果】 1.血吸虫病肝纤维化组肝脏标本与对照组肝脏标本相比,在肝纤维化发展过程中HSP47及胶原表达明显增多,差别有统计学差异(P0.05)。HSP47主要分布于肉芽肿周围活化的HSC胞浆中。 2.实验性血吸虫肝纤维化小鼠模型中,于感染尾蚴后第12周取肝组织检测,感染组与对照组相比,HSP47表达增多,差别有显著性差异(P0.05),且阳性表达多分布于肉芽肿周围活化的HSC胞浆中。【结论】 1. HSP47的表达促进肝纤维化的发展,其过程可能是通过调节HSC细胞的功能,影响胶原的分泌,使得ECM的成分发生变化。 2. HSP47的表达多局限于活化的HSC中,推测HSP47可能是众多刺激HSC活化的因子作用通路下游的关键蛋白之一,参与ECM过多合成和分泌。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R575.2
【图文】：

HE染色,患者,纤维化,肉芽肿

血吸虫病患者组（20 例）对75.00% 44.80±10.68 L) 30.75±13.75 L) 26.10±12.91 ol/L) 13.47±4.03 ol/L) 3.48±1.46 27.45±15.48 3.00±0.92 纤维化患者肝组织 HE 病理染色及 Masson纤维化患者行肝穿刺送病理活检。光镜下 HE 染色卵肉芽肿为中心发生干线性纤维化为特点，虫卵周由肝间质细胞包裹，纤维组织延肉芽肿周围延伸。细胞聚集浸润的地方胶原沉积较多，呈明显灰蓝色

肝组织,患者,纤维化,棕黄色

3. 免疫组化检测肝组织中 HSP47 和α-SMA 的表达：经免疫组化实验，20 例血吸虫病肝纤维化患者肝穿组织中有 17 例 HSP47 检测阳性(阳性率 85% ) ，棕黄色颗粒代表 HSP47 阳性，可见阳性表达的范围集中于纤维化区域。红色部分代表α-SMA 阳性（用于标记活化 HSC），阳性部分集中在纤维化区域。行双染实验后，棕黄色颗粒与红色区域大部分重合说明 HSP47 主要表达于活化HSC（α-SMA 标记）中。而对照组肝组织中未见明显的 HSP47 表达。

肝组织,凝胶,产物,患者

HSP47 α-SMA 图 2 血吸虫病肝纤维化患者肝组织4. RT-PCR 检测肝组织中 HSP47 的在血吸虫病肝纤维化患者肝组织中，可中只见 HSP47 极弱的表达，其分子量大小约为 189bp。1 2 3 4 5 6

【参考文献】