七味铁屑胶囊对NAFLD大鼠的疗效观察及ERS相关因子的影响

发布时间：2020-07-13 07:57

【摘要】：背景与意义：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)，是指无过量饮酒史，除外病毒、药物等其他明确损肝因素所致的以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变为主要特征的临床病理综合征。NAFLD在我国已是仅次于病毒性肝炎的第二大慢性肝病,是导致无症状性转氨酶升高的首要病因[1]，成为当今学者们广泛关注的问题。目前临床上NAFLD治疗尚无特效药物。中医学及民族医学认为该病为饮食不节，嗜食肥甘厚味，肥胖或饮酒过度，导致气机阻滞，湿热内生，痰瘀互结，阻滞肝络[2]。因此，治疗应以疏肝理气，活血化瘀，化痰祛湿为主。七味铁屑胶囊主要由铁屑(诃子制)、北寒水石、藏木香、木香、甘青青蓝、红花、五灵脂膏七味药物组成，全方配伍达到行气活血、平肝清热止痛之功效，治疗符合脂肪肝的病机特征，但机制尚不明确，因此寻找治疗非酒精脂肪性肝病、延缓其进程的药物已成为目前医学界尤其是肝病学界学者研究的热点。为此，将传统藏药制备的七味铁屑胶囊用于治疗单纯高脂饮食诱发的NAFLD大鼠，并通过HE染色、Western blot等技术，观察七味铁屑胶囊治疗后NAFLD大鼠肝组织GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表达变化、血清生化指标及肝脏病理组织学改变的差异，旨在研究七味铁屑胶囊对NAFLD有无确切治疗效果并初步探索其作用机制。目的：采用单纯高脂饮食成功诱导大鼠NAFLD模型，并同时使用七味铁屑胶囊进行治疗12周后，观察其对NAFLD大鼠的治疗效果，并初步探讨其相关机制。方法：选用4周龄Wistar大鼠60只，雄性，随机分为4组：①N组(正常组)，基础饲料喂养；②F组(模型组)，单纯高脂饲料喂养，以上两组各18只，分别于4周(3只)、8周(3只)、12周(12只)3个时相点采集标本，其中4周、8周标本用于验证NAFLD造模成功与否的观察；③Q组(七味铁屑胶囊治疗组)，纯高脂饮食合并七味铁屑胶囊喂养；④P组(易善复胶囊阳性对照组)，纯高脂饮食合并易善复胶囊喂养，Q组与P组各12只，分别于12周时集中采集标本。采用HE染色光镜下观察各组大鼠肝脏病理组织学变化；全自动生化分析仪检测各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)水平；用Western blot法检测各组大鼠肝组织中GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α蛋白表达量。结果： 1.12周各组大鼠一般情况观察： N组大鼠皮毛光泽，体型及活动正常。F组大鼠毛色光泽差，活动度低，体型肥硕，反应迟钝。Q组与P组大鼠皮毛光泽稍差，活动度正常，体型及反应敏捷度介于正常与模型组之间。 2.12周各组肝脏外观变化比较： N组大鼠肝脏表面光滑，色泽鲜红，边缘锐利。F组大鼠肝脏肉眼观体积增大，颜色浅黄，质地软韧，包膜紧张，边缘变钝，切面有油腻感。Q组与P组大鼠肝脏色泽浅黄，质地、体积均介于正常与模型组之间，通过肉眼观察差别不明显。 3.12周各组大鼠肝指数比较: F组大鼠在造模12周后肝指数明显高于N组大鼠(P0.01)；Q组与P组大鼠肝指数与F组比较明显降低,差异有统计学意义(P0.01)。 4.12周各组大鼠肝脏组织病理学变化及肝脏脂肪变程度和炎症活动度计分： N组大鼠肝小叶结构清晰,肝索排列整齐呈放射状，肝窦正常，细胞形态规则,无肝细胞脂肪变,肝脏脂肪变程度计分为0.00±0.00；F组大鼠肝小叶结构破坏，肝细胞中大量脂滴，肝脏脂肪变程度计分为3.75±0.46，与N组比较差异具有显著统计学意义(P0.01)。Q组与P组大鼠肝小叶界线不清,肝索排列紊乱，脂肪变明显增加,肝脏脂肪变程度计分分别为2.50±0.53、2.37±0.51，明显低于F组(P0.01)。 N组大鼠肝脏炎症活动度计分为0.00±0.00；F组大鼠肝脏炎症明显，可见小叶内散在坏死灶，汇管区有明显炎症，炎症程度计分为3.87±0.35，显著高于正常组(P0.01)；Q组与P组大鼠肝细胞点灶状坏死，肝小叶内可见不同程度的炎细胞浸润，炎症活动度计分分别为，2.62±0.51、2.25±0.46，显著低于F组(P0.01)。 5.12周时各组大鼠血清生化指标的比较： F组、Q组、P组大鼠血清AST、ALT、TG、FFA均有升高；与N组比较，F组血清AST、ALT、TG、FFA水平显著升高(P0.01)；与F组相比，Q组和P组大鼠血清AST、ALT、TG、FFA明显降低，有显著统计学差异(P0.01)；Q组和P组二者之间比较，二组大鼠血清AST、ALT、TG、FFA差别无统计学意义(P0.05)。 6.12周各组大鼠GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α的表达变化：与N组比较，F组大鼠肝组织GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表达量显著增高(P0.01)；与F组比较，Q组、P组大鼠肝组织GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表达量显明显降低(P0.01)；而Q组与P组相比，二组的大鼠肝组织GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表达量无明显统计学差异(P0.05)。结论： 1.七味铁屑胶囊治疗NAFLD大鼠12周后，通过光镜观察、血清生化学检查，发现大鼠肝脏脂肪变性程度明显减轻，血清ALT、AST、TG、FFA水平下降，提示使用传统藏药制备的七味铁屑胶囊可以改善NAFLD大鼠肝功能、降低血脂、纠正脂质代谢紊乱，抑制脂质在肝细胞堆积，从而减轻肝脏脂肪变性，达到治疗NAFLD目的。 2.七味铁屑胶囊治疗后的NAFLD大鼠肝组织GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α蛋白表达量显著下调，提示七味铁屑胶囊可能通过下调大鼠肝组织GRP78蛋白表达水平，恢复内质网稳态，阻止固醇调节级联反应及细胞凋亡等信号通路的启动，减少TG在肝细胞内蓄积，抑制炎症反应，改善肝细胞功能，减轻肝脏脂肪变性。这一“ERS—脂质代谢紊乱—凋亡及炎症”通路可能是其治疗NAFLD的作用机制之一。 3.通过光镜、血生化指标、Western blot法及软件分析，发现使用七味铁屑胶囊和易善复胶囊分别治疗的两组NAFLD大鼠中，二组的各个指标比较无明显统计学差异，但二组较F组均有改善，说明两种药物均对NAFLD大鼠有治疗作用。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.5
【图文】：

色泽,外观,质地,包膜

图 1 正常组(N 组)12 周大鼠肝脏外观表面光滑，色泽鲜红，边缘锐利图 2 NAFLD 模型组(F 组)12 周大鼠肝脏外观体积增大，颜色浅黄，质地软韧，包膜紧张，边缘变钝，切面有油腻感。

切面图,质地,切面,包膜

图 2 NAFLD 模型组(F 组)12 周大鼠肝脏外观体积增大，颜色浅黄，质地软韧，包膜紧张，边缘变钝，切面有油腻感。图 3 七味铁屑胶囊治疗组(Q 组)12 周大鼠肝脏外观色泽浅黄，质地软韧、体积、大小、切面油腻感均介于正常与模型组之间

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【参考文献】