蛋白酶激活受体在肠易激综合征患者结肠黏膜组织中的表达及意义

发布时间：2020-07-13 19:39

【摘要】：研究目的 肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是常见的功能性肠道疾病,严重影响人们生活质量。迄今为止,其发病机制尚未阐明。目前认为IBS发病可能与肠道动力异常、内脏感觉异常、黏膜微炎症、感染、神经-内分泌调控异常、遗传、饮食不耐受等多种因素相关,其中胃肠动力和内脏感觉的异常被认为是IBS发病的主要病理生理学基础。蛋白酶激活受体(protease-activated receptors, PARs)属于与G蛋白相偶联、有七个跨膜单位的受体家族,包括4个亚型。PARs在体内分布较广泛,尤其是胃肠道,被激活后可产生多种生物学效应,参与调控胃肠道平滑肌运动、胃肠感觉及黏膜炎症等多种功能,其在功能性胃肠病发病过程中的作用近年来倍受关注。然而,当前大部分实验多应用于动物模型,在人体上的研究相对较少。因此,本研究通过观察蛋白酶激活受体超家族在IBS患者结肠黏膜中的表达变化,从而进一步探讨PARs在IBS疾病过程中的可能作用。 研究方法 研究对象选自上海长海医院消化内科门诊及住院人群。(1)正常组：选取18例健康者作为正常对照,平均年龄为53.11±13.65岁,其中男性14人,女性4人。所有健康受试者均无胃肠道疾病病史及临床症状。(2)腹泻型肠易激综合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome, D-IBS)组：按照罗马Ⅲ诊断标准入选28例D-IBS患者作为研究对象,平均年龄为49.044±13.73岁,其中男性15人,女性13人。(3)便秘型肠易激综合征(constipation-predominant irritable bowel syndrome, C-IB S)组：按照罗马Ⅲ诊断标准入选12例C-IBS患者作为研究对象,平均年龄为51.08±±10.11岁,其中男性5人,女性7人。三组人群在年龄及性别上无差别。三组均无明显阳性体征,常规实验室检查及辅助检查排除器质性疾病,行结肠镜检查均显示未见明显异常,并于乙状结肠与直肠连接部乙状结肠侧钳取结肠黏膜组织,应用蛋白印迹法及实时荧光定量PCR技术检测蛋白酶激活受体超家族的表达变化。 结果 采用蛋白印迹方法,PAR2及PAR4在D-IBS患者的结肠黏膜中的表达与正常组相比均明显增加,其灰度值分别为(0.99±0.67 vs 0.63±0.38,P=0.038；0.37±0.14 vs0.25±0.11,P=0.013)；同时,实时荧光定量PCR检测结果与蛋白印迹方法的结果相一致(5.71±2.54 vs 4.15±1.87,P=0.040；5.51±2.27 vs 3.77±2.06,P=0.031)。然而,两种方法的检测结果均显示,D-IBS患者组与正常对照组相比,结肠黏膜中PAR1的表达在两组之间无统计学差异(0.83±0.27 vs 0.72±0.36,P=0.300；6.70±2.37 vs6.00±2.65,P=0.514)。此外,PAR2蛋白以及PAR4基因在D-IBS组和C-IBS组中的表达无明显差异(0.08±0.07 vs 0.07±0.06,P=0.908；3.28±0.95 vs 2.14±0.62,P=0.204)。 结论 PARs的表达,尤其是PAR2、PAR4,在IBS患者的结肠黏膜中明显增高,提示其可能在IBS疾病的发生、发展过程中发挥某些作用,与患者的某些症状如腹痛、腹胀等密切相关。因此,PARs有可能成为IBS新的治疗靶点。
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R574
【图文】：

(三 )westernblot示PARZ在D一IBS与C一IBS组表达无差异D一xBS与C一xBS组患者乙状结肠勃膜总蛋白被提取，行 westernblotting检测。内参选择GAPDH。两组在55kd处可见特异性的蛋白条带(图1一7)。使用ImageJ1410图像分析软件对条带的灰度值进行分析后发现，D一IBS与C一IBS组患者的结肠勃膜均可见PARZ的蛋白表达，其在D一IBS患者结肠勃膜中的表达相对灰度值为0.08士0.07，而C一IBS组为0.07士0.06，两组间的差异无统计学意义(尸=0.908)(图l一8)。

喇肉憋卿拐翔常，绷脚洋徽攀37KD图2一l两组结肠勃膜PAR4的蛋白表达01匀月nU.二Od<口O利PeN一一eLU﨑OUuo一ssa﨎xad比寸d<a>一祠.一a比!BSContro!图2一2两组结肠勃膜队R4的蛋白表达变化，与正常组相比*尸二0.013(二)westernb一ot示甩RI在D一IBS结肠的表达无显著增高D一IBs患者乙状结肠勃膜总蛋白被提取，行 westembtotting检测。内参选择GAPDH。两组在66kd处可见特异性的蛋白条带(图2一3)。使用 ImagcJ1.410图像分析软件对条带的灰度值进行分析后发现，正常组和D一IBS患者的结肠勃膜均可见PARI的蛋白表达，其在D一IBS患者结肠勃膜中的表达相对灰度值为0.83士

66KDGAPDH37KD图2一3两组结肠勃膜PARI的蛋白表达n

本文编号：2753887