乙型肝炎病毒X蛋白对小鼠足细胞补体调节蛋白CD59和Crry表达的影响

发布时间：2020-07-17 06:13

【摘要】：目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBx)对体外培养的小鼠足细胞补体调节蛋白CD59和Crry表达的影响。方法:培养的小鼠足细胞分为乙型肝炎病毒(HBV)X基因转染组(Ad-X)、空白足细胞组(B)和腺病毒空载体转染组(Ad),PT-PCR和流式细胞术检测HBVX基因转染对CD59和Crry基因和蛋白的表达,MTT法检测其对补体激活的影响;观察ERK1/2、P38MAPK、PI-3K通路抑制剂对足细胞CD59和Crry表达的影响。结果:与空白足细胞组(B)相比,腺病毒空载体组(Ad)对小鼠足细胞CD59和Crry的基因和蛋白表达无显著影响(P值均0.05),转染HBVX基因组(Ad-X )CD59在蛋白表达水平上显著高于B组(P0.005)和Ad组(P0.005),在基因表达水平上也明显高于B组(P0.05)和Ad组(P0.05)。Ad-X组Crry在蛋白表达水平上显著高于B组(P0.005)和Ad组(P0.005),在基因表达水平上也明显高于B组(P0.05)和Ad组(P0.05)。通路抑制剂加入Ad-X组后, SB203580组与无抑制剂的Ad-X组比较,CD59蛋白表达明显降低(P0.01), Crry蛋白表达也明显降低(P0.01)。LY294002组、U0126组、DMSO组与无抑制剂的Ad-X组比较CD59和Crry蛋白的表达无显著差异(P值均0.05)。MTT法提示在各个血清稀释点上,Ad-X组细胞裂解抑制率均明显高于B组和Ad组(P值均0.05), B组和Ad组细胞存活率无统计学差异。结论:HBx可能通过活化P38MAPK通路上调小鼠足细胞CD59和Crry蛋白和基因的表达,抑制补体介导的足细胞裂解,这可能导致HBV在足细胞潜伏感染,不易被清除,从而在HBV-GN发生中发挥作用。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R512.62;R692
【图文】：

散点图,足细胞,转染,病毒组

图 1 分化态足细胞空白组（B）、腺病毒空载体转染组(Ad)、转染 HBx 病毒组(Ad-X)CD59和 Crry 阳性细胞表达率（流式细胞术散点图和统计后柱形图），*表示 CD59 和 Crry 两种蛋白Ad-X 组与对照组相比 P 值均<0.005.2. ERK1/2、P38MAPK、PI-3K 通路抑制剂对足细胞 CD59 和 Crry 表达的影响SB203580 组与 Ad-X 组比较， CD59 和 Crry 的表达明显减少， P 均＜0.01,LY294002 组、U0126 组、DMSO 组与 Ad-X 组比较，CD59 和 Crry 的表达无统计学差异。见图 2。

柱形图,柱形图,流式,抑制剂

图 2 各组细胞加入抑制剂后转染 Ad-X 48 小时后表达 CD59 和 Crry 的流式散点图和统计柱形图。*表示 CD59 和 Crry 两种蛋白 SB 与 Ad-X 组相比 P 值均＜0.01。3. RT-PCR 结果转染 Ad-X 48 小时后 CD59 及 Crry mRNA 较空白组和腺病毒空载体转染组均表达增高（P 均<0.05）。而腺病毒空载体转染组和空白组 CD59 及 CrrymRNA 差异无统计学意义。见图 3。半定量 RT-PCRCD59 和 Crry mRNA 凝胶电泳结果

柱形图,足细胞,转染,腺病毒

图 3 分化态足细胞空白组（B）、腺病毒空载体转染组(Ad)、转染 HBx 病毒组(Ad-X)CD59 和Crry mRNA 表达的电泳凝胶图和统计柱形图（RT-PCR），*表示 P＜0.05。4. 表达 HBx 的足细胞补体激活的抵抗性与空白组和腺病毒空载体转染组比较，转染 Ad-X 48 小时后的分化态足细胞对补体的激活有显著的抑制作用，P 均＜0.05。见表 1 及图 4。表 1 B 组、Ad 组及 Ad-X 组小鼠足细胞对人血清补体激活的相对裂解抑制率（xˉ±s）B Ad Ad-X1：4 0.17±0.17 0.18±0.18 0.43±0.1991：8 0.25±0.22 0.32±0.31 0.72±0.321：16 0.34±0.24 0.34±0.33 0.82±0.381：32 0.44±0.32 0.36±0.3 0.83±0.291：64 0.48±0.36 0.42±0.38 0.86±0.191：128 0.58±0.39 0.45±0.35 1.08±0.2

【参考文献】