EPA、DHA抑制小鼠溃疡性结肠炎作用的比较研究

发布时间：2020-07-30 20:42

【摘要】：目的:以C57BL/6J小鼠为研究对象,不同剂量EPA、DHA预处理后,通过饮水给予葡聚糖硫酸钠(dextran sulphate sodium,DSS)构建溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)动物模型,比较EPA、DHA干预对小鼠UC的影响。从肠黏膜屏障维护、炎症通路活化和肠上皮增殖修复三个方面对EPA、DHA影响小鼠肠炎的机制进行探讨,为明确EPA、DHA在UC防治中的应用价值提供科学依据。方法:8周龄雄性小鼠按照体重随机分为7组:正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组、DHA低剂量组、DHA高剂量组、EPA低剂量组和EPA高剂量组。DHA、EPA低、高剂量组分别按照100mg/kg?bw、400mg/kg?bw的剂量灌胃给予相应脂肪酸,其余三组予以溶剂(10%阿拉伯树胶溶液)灌胃,干预一个月。造模开始后,空白对照组全程正常饮水,其余6组通过饮水给予两周期DSS暴露(第一周期:6日2%DSS饮水+15日正常饮水;第二周期:6日2%DSS饮水+8日正常饮水)以构建小鼠UC模型;期间DHA、EPA干预组继续每日脂肪酸干预,正常对照组和模型对照组每日接受溶剂(10%阿拉伯树胶溶液)灌胃,阳性药物对照组每日予以500 mg/kg?bw柳氮磺吡啶灌胃。造模期间每日记录小鼠体重、腹泻程度及便血情况,计算疾病活动指数(DAI),动态评估UC程度。实验第36日处死小鼠,解剖分离结肠组织,观察结肠长度及水肿程度,HE染色评价肠组织炎性细胞浸润程度,阿利新蓝染色评估肠黏膜杯状细胞黏液分泌,气相色谱法检测肠组织脂肪酸构成。蛋白印迹法检测肠黏膜紧密连接、黏附性连接相关蛋白及其上游ERK、Akt,Hedgehog通路和黏蛋白TFF3水平;趋化因子MCP-1,炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,炎性细胞标志物F4/80、MPO,炎症通路NLRP3/IL-1β、IL-6/Stat3、TLR4/NF-κB、TNF-α/NF-κB相关蛋白水平;增殖相关Wnt/β-catenin通路蛋白DVL2、p-GSK3β、β-catenin、c-myc、Cyclin-D1、PCNA以及凋亡相关蛋白p53、Caspase-3水平,以揭示EPA、DHA影响UC作用机制。结果:EPA、DHA干预可提高小鼠结肠EPA、DHA含量。EPA明显改善DSS所致的小鼠体重丢失,降低DAI评分,减轻DSS所致的结肠充血、水肿,抑制结肠组织炎性细胞浸润,相较之下DHA的效果不明显。肠黏膜屏障相关蛋白结果显示,EPA明显抑制Akt、ERK活化,提高Hedgehog通路蛋白SHH、SMO水平,促进紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin表达;促进c-myc介导的E-cadherin生成,增强肠上皮细胞黏附性连接,保护肠黏膜机械性屏障。EPA可明显上调黏蛋白TFF3表达,增加杯状细胞数量、促进黏液分泌,维持肠黏膜黏液屏障完整,相反DHA的作用不明显。对炎症相关蛋白检测结果显示,EPA明显降低肠上皮趋化因子MCP-1和炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,抑制中性粒细胞和巨噬细胞浸润(标志物MPO、F4/80表达下降),下调NLRP3/IL-1β、IL-6/Stat3、TLR4/NF-κB、TNF-α/NF-κB炎症通路蛋白表达。蛋白印迹结果还显示,EPA可上调增殖相关Wnt/β-catenin通路及下游靶蛋白c-myc、Cyclin-D1、PCNA表达,增加凋亡相关蛋白p53、Caspase-3水平。结论:1.EPA显著抑制DSS诱导的小鼠UC,相较之下,DHA效果不明显。EPA在UC防治中更具应用价值。2.EPA通过抑制Akt、ERK活化,上调Hedgehog通路,促进紧密连接蛋白表达;促进c-myc介导的黏附性连接蛋白E-cadherin表达,维护肠黏膜机械性屏障的完整性;通过促进TFF3表达,增加杯状细胞黏液合成,维持肠黏膜黏液屏障。3.EPA抑制DSS诱导的肠上皮炎性细胞浸润和炎症因子表达,抑制NLRP3/IL-1β、IL-6/Stat3、TLR4/NF-κB、TNF-α/NF-κB炎症通路活化。4.EPA通过增强细胞凋亡,上调Wnt/β-catenin通路蛋白表达,促进损伤细胞的清除和肠上皮的再生修复。
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R574.62

【参考文献】