PPARγ特异配体罗格列酮对肝星状细胞MMPs、TIMPs及胶原表达影响

发布时间：2020-08-08 04:17

【摘要】： 目的:肝纤维化是多种慢性肝损伤的共同后果,进一步则发展为肝硬化甚至肝癌,是一类世界性的严重危害人们健康的主要疾病。现已知肝纤维化是一个可逆性病变,而肝硬化是不可逆的。活化的肝星状细胞(hepatic stellate cell ,HSC)是肝纤维化发生的核心环节。活化的HSC通过旁分泌与自分泌作用合成分泌多种细胞外基质(extracellular matrixes, ECM),同时合成、释放大量基质金属蛋白酶组织抑制物(tissue inhibitors of metalloproteinases ,TIMPs),抑制胶原酶、明胶酶等基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinases ,MMPs)活性,减少ECM降解,导致ECM合成大于降解,最终过量积聚在肝内形成肝纤维化。过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor gamma,PPARγ)是一种配体激活的核受体转录因子,与肝纤维化之间关系的研究主要集中于PPARγ与HSC激活之间的关系上。研究证实,静止状态HSC表达PPARγ,而活动状态的HSC表达PPARγ明显减少,PPARγ在维持HSC作为静止状态的表型上具有重要作用,PPARγ表达减少与HSC激活密切相关。PPARγ及其配体在肝纤维化形成中的作用已成为肝纤维化研究领域里的一个新热点,但其具体机制尚不完全清楚。目前认为PPARγ配体作为PPARγ的激动剂,可抑制HSC的增殖,减少肝内胶原积聚和增加肝内胶原酶活性。本研究旨在探讨不同浓度的PPARγ特异配体罗格列酮对HSC合成基质金属蛋白酶、金属蛋白酶组织抑制物及胶原的影响,以期进一步证实PPARγ对HSC生物学特性的影响,对研究肝纤维化的发生、发展机制及临床治疗具有重要的意义。 方法:①细胞培养:用含10%胎牛血清的DMEM培养HSC-T6,传4-5代后接种于塑料细胞培养瓶,换用无胎牛血清的DMEM培养基继续培养,待细胞贴壁后分组。分为A组:空白对照组;B组:5umol/L罗格列酮组;C组:10umol/L罗格列酮组;D组:15umol/L罗格列酮组;E组:20umol/L罗格列酮组。分别于培养24h后收取细胞。每组均培养6瓶。 ②检测不同浓度组MMPs、TIMPs及胶原的改变。用TR-izol试剂盒,参照说明抽提细胞的总RNA。利用半定量RT-PCR测定MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢmRNA水平的表达。琼脂糖凝胶电泳后使用Quantity One图像分析系统分析。 ③数据统计与分析:检测值以均数±标准差表示,采用SPSS10.0统计软件包进行方差分析,P0.05为差异有统计学意义。 结果:实验结果显示:TIMP-1的含量ABCDE; TIMP-2:ABCDE;COLⅠ:ABCDE;COLⅢ:ABCDE;MMP-2:ABCDE;MMP-9:ABCDE。PPARγ特异配体罗格列酮可以增强HSC对MMP-2、MMP-9的表达,抑制HSC表达TIMP-1、TIMP-2、COLⅠ、COLⅢ(P0.01),并在一定范围内,呈剂量依赖性(P0.01)。 结论:罗格列酮通过上调PPARγ可以抑制HSC的增殖与活化,下调TIMPs的表达,增强MMPs的活性,从而增加ECM的降解,促进HSC凋亡,逆转肝纤维化。因此,PPARγ对HSC活化的分子调节在肝纤维化发生中起着重要作用,随着对PPARγ在肝纤维化中调节作用的深入研究,将为肝纤维化的治疗提供新的治疗策略。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R575.2

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本文编号：2785037