HepG2细胞中与HBV复制相关的微染色体重塑
发布时间：2020-08-11 07:03
【摘要】：目的:乙型肝炎病毒(HBV)的复制中间体共价闭合环状DNA(cccDNA),与组蛋白和非组蛋白结合构成了病毒微染色体,而病毒微染色体重塑,如乙酰化等组蛋白翻译后修饰对HBV复制起着重要的调控作用。我们的研究是为了进一步明确在有HBV复制的HepG2细胞中,cccDNA结1合组蛋白H3除发生了乙酰化修饰外,是否还发生了其他和HBV复制相关的微染色体重塑情况。 方法:在成功构建了HBV细胞复制模型的基础上,我们将染色质免疫共沉淀(ChIP)技术和实时定量PCR相结合,检测了瞬时转染线性HBV DNA到HepG2细胞后不同时间点的cccDNA结合乙酰化组蛋白H3,磷酸化组蛋白H3和甲基化组蛋白H3的动态变化情况。 结果:在有HBV复制的HepG2细胞中,cccDNA结合组蛋白H3不仅发生了乙酰化修饰,同时还发生了磷酸化和单甲基化修饰。并且,在转染了线性HBV DNA后不同时间点的cccDNA结合组蛋白H3的乙酰化和甲基化修饰的动态变化和HepG2细胞中HBV复制的动态变化是相平行的。 结论:我们的结果证实了和HBV复制相关的微染色体重塑不仅有组蛋白H3乙酰化修饰,还有磷酸化和单甲基化修饰,且cccDNA结合组蛋白H3乙酰化,磷酸化和单甲基化的状态和HBV的复制水平有一定的关系,这为我们在染色质重塑水平调控HBV复制,制定有效的抗病毒方法提供了新的思路和靶点。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R512.62
【图文】：
1 2 3切(3200bp,2600bp) 2.HindIII 单酶切(58V1.0 digested by HindIII and SapI Lane 3.λ-EcoT14 digest DNA marker复制模型染 HepG2 细胞切酶将重组质粒 pUC19-HBV1.0 单酶NA（图 2），并将其胶回收纯化。
18图 3.转染 24 小时后荧光显微镜下绿色荧光蛋白的表达ression of GFP after 24 h post-transfection under a fluern blot 及 Southern blot 分析 HBV DNA 转染 HepG2 细胞 48h 后，用 Southern b细胞中提取的胞浆 HBV DNA，胞核 DNA 和总 RN：开放环状 HBV DNA(OC DNA),双链 DNA（DS DNA图 4.A），cccDNA（图 4.B），以及特异性转录子：3.5
图4.A.提取转染后48h的细胞胞浆DNA进行Southern blot B.提取转染后48h的NA 进行 Southern blot C.提取转染后 48h 的细胞总 RNA 进行 Northern blotFig4.A.Southern blot analysis of cytoplasmic HBV DNA extracted from cells a-transfection B.Southern blot analysis of nuclear cccDNA extracted from cpost-transfection C.Northern blot analysis of total RNA at 48h post-tran2.2.3 细胞培养上清中病毒标志物的动态变化线性 HBV DNA 转染 HepG2 细胞 12h 后，同阴性对照相比，即可在上清中检测到 HBV DNA 复制产生的病毒标志物 HBsAg，HBeAg。在转HBsAg 和 HBeAg 的分泌显著增加(P<0.05)，到转染 72h 后病毒标志物仍达，结果如表 1 所示。表 1.转染后各时间点细胞培养上清液中病毒标志物水平(x±s)Table1.The levels of viral markers in cell culture supernatants at different tiansfection(x±s)转染时间 12h 24h 48h
本文编号：2788750
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R512.62
【图文】：
1 2 3切(3200bp,2600bp) 2.HindIII 单酶切(58V1.0 digested by HindIII and SapI Lane 3.λ-EcoT14 digest DNA marker复制模型染 HepG2 细胞切酶将重组质粒 pUC19-HBV1.0 单酶NA（图 2），并将其胶回收纯化。
18图 3.转染 24 小时后荧光显微镜下绿色荧光蛋白的表达ression of GFP after 24 h post-transfection under a fluern blot 及 Southern blot 分析 HBV DNA 转染 HepG2 细胞 48h 后，用 Southern b细胞中提取的胞浆 HBV DNA，胞核 DNA 和总 RN：开放环状 HBV DNA(OC DNA),双链 DNA（DS DNA图 4.A），cccDNA（图 4.B），以及特异性转录子：3.5
图4.A.提取转染后48h的细胞胞浆DNA进行Southern blot B.提取转染后48h的NA 进行 Southern blot C.提取转染后 48h 的细胞总 RNA 进行 Northern blotFig4.A.Southern blot analysis of cytoplasmic HBV DNA extracted from cells a-transfection B.Southern blot analysis of nuclear cccDNA extracted from cpost-transfection C.Northern blot analysis of total RNA at 48h post-tran2.2.3 细胞培养上清中病毒标志物的动态变化线性 HBV DNA 转染 HepG2 细胞 12h 后，同阴性对照相比，即可在上清中检测到 HBV DNA 复制产生的病毒标志物 HBsAg，HBeAg。在转HBsAg 和 HBeAg 的分泌显著增加(P<0.05)，到转染 72h 后病毒标志物仍达，结果如表 1 所示。表 1.转染后各时间点细胞培养上清液中病毒标志物水平(x±s)Table1.The levels of viral markers in cell culture supernatants at different tiansfection(x±s)转染时间 12h 24h 48h
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 ;Effects of cell cycle on telomerase activity and on hepatitis B virus replication in HepG_22.2.15 cells[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2004年04期
本文编号：2788750
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/xiaohjib/2788750.html
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