花生四烯酸CYP450表氧化酶代谢物EETs在病毒性暴发型肝炎中作用研究

发布时间：2020-08-12 05:59

【摘要】：背景及目的重型肝炎发病率高，危害大，发病机制非常复杂，临床缺乏特异有效的治疗手段。经研究发现EETs具有抗炎、促进新生血管形成、调节离子通道、舒张血管以及促进肿瘤细胞的增殖、迁移等作用。EETs产生于花生四烯酸的第三条代谢途径，由CYP450表氧化酶的亚家族CYP2C和CYP2J的同工酶催化花生四烯酸生成具有较高生物活性的四种形式EETs:5,6-EETs、8,9-EETs、11,12-EETs和14,15-EETs。正常情况下生成的EETs在很短的时间内即被可溶性环氧化物水解酶(sEH)催化降解,产生DHET。通过抑制sEH（sEHI）可减慢EETs的降解速度，提高EETs的水平。目前关于EETs在病毒性暴发型肝炎中的研究在国内外未见报道。CYP450表氧化酶可催化多种物质的合成和代谢，亚家族以CYP2J和CYP2C家族为主，CYP2C9是CYP2C家族中的一员，主要分布在肝脏，约占肝微粒体CYP酶总量的20％，肝疾病对CYP2C9的影响比较明显。近十年来sEH抑制剂（sEHI）在活体和临床试验中的应用进步显著。研究表明注射sEHI可降低自发性高血压大鼠及血管紧张素介导的高血压大鼠的血压，并能减缓其肾脏的损害。近年来sEHI作为心血管疾病的新的治疗靶点已进入临床Ⅱ期试验。本研究通过建立MHV-3病毒诱导的小鼠病毒性暴发型肝炎动物模型，研究花生四烯酸CYP450表氧化酶代谢物EETs在病毒性暴发型肝炎中的作用及其可能机制，同时加用sEH抑制剂AUDA减慢EETs降解，升高体内内源性EETs水平，观察小鼠肝脏及血清内EETs有无升高，对小鼠生存率有无影响，可否作为病毒性暴发型肝炎抗炎治疗的新靶点。 方法建立Balb/c小鼠经MHV-3病毒诱导的病毒性暴发型肝炎模型，用ELISA法检测不同时间点肝脏、血清内11,12-EETs、14,15-EETs含量变化；用免疫组化、western blot等方法检测肝脏内EETs是否由花生四烯酸经CYP2C9产生；加用sEH抑制剂AUDA5mg/kg减慢EETs的降解速度,观察小鼠肝脏及血清内EETs有无增多，小鼠生存时间有无延长。 结果1、在暴发型肝炎病程中，11,12-EETs、4,15-EETs增多，在72h时P0.05，具有统计学意义。提示在MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎的病理进程中，肝脏EETs水平发生改变，可能参与了该病理过程。2、在MHV-3病毒诱导的小鼠暴发型肝炎肝组织切片中，免疫组化显示CYP2C9无表达；在MHV-3病毒诱导的小鼠暴发型肝炎肝组织提取的蛋白中，western blot未见到阳性结果。证明肝组织内EETs并非由花生四烯酸经酶CYP2C9产生。3、加用sEH抑制剂AUDA后小鼠肝脏内11,12-EETs增多，但P0.05，无统计学意义，且小鼠的生存时间无明显延长。 结论 1.EETs参与了MHV-3诱导的小鼠病毒性暴发型肝炎的病理过程，但不能阻断暴发型肝炎的进展，不能提高病毒性暴发型肝炎小鼠的生存时间。 2.sEH抑制剂AUDA未能使小鼠暴肝模型肝脏11,12-EETs明显增多，小鼠生存率无改善；同时在该模型中，肝脏CYP2C9无表达，提示在该模型中，可能肝脏CYP2C9受损，导致上游EETs生成减少，未能发挥抗炎的保护作用。11,12-EETs、14,15-EETs增多，可能与其他类型的表氧化酶有关。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R575.1
【图文】：

苏木素复染15s±2s，控制镜下核染色深度，流水冲洗7 ）梯度酒精脱水，80%乙醇3min 90%乙醇3min 无水乙醇）中性树胶封片，封片后置烤箱内烘干； ）切片干后于倒置显微镜下观察。 结 果型肝炎病程中，11,12-EETs、14,15-EETs 增多，在 72h 时意义（图 1、2）。提示在 MHV-3 诱导的小鼠暴发型肝炎的病 水平发生改变，可能参与了该病理过程。

暴发型肝炎病程中，14,15-EET 增多，在 72h 时 P<0.05，具有统计学意3 病毒感染小鼠的暴发型肝炎肝组织提取的蛋白中，western b（图 3）；同时，在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴发型肝炎肝组织示 CYP2C9 无表达（图 4、5、6、7）。证明肝组织内 EETs 并非 CYP2C9 产生。-3 病毒感染小鼠的暴发型肝炎肝组织提取的蛋白中，行 western blot 阳性结果；CYP2C9正常组 暴肝组

图 2 在暴发型肝炎病程中，14,15-EET 增多，在 72h 时 P<0.05，具有统计学意义；2、在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴发型肝炎肝组织提取的蛋白中，western blot 未见到阳性结果（图 3）；同时，在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴发型肝炎肝组织切片中，免疫组化显示 CYP2C9 无表达（图 4、5、6、7）。证明肝组织内 EETs 并非由花生四烯酸经酶 CYP2C9 产生。图 3 在 MHV-3 病毒感染小鼠的暴发型肝炎肝组织提取的蛋白中，行 western blot 亦未见到阳性结果；CYP2C9正常组 暴肝组

【参考文献】

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1 唐杨烽;徐志云;;花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶代谢产物环氧二十碳三烯酸生物学作用[J];国际心血管病杂志;2010年02期

2 李锐;邱健;;细胞色素氧化酶CYP2C9基因多态性及其与心血管药物代谢及疾病关系研究进展[J];心血管病学进展;2010年02期

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本文编号：2790144