Clodronate脂质体对急性坏死性胰腺炎大鼠Kupffer细胞凋亡的作用

发布时间：2020-08-15 12:37

【摘要】： 目的：急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis, ANP)病情凶险,病程发展快,病死率高,其病程中常出现全身性炎症反应综合征、严重感染、感染性休克及多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome, MODS),导致死亡。近年来随着对其发病机制研究的不断深入,发现巨噬细胞在ANP中起重要的作用。本研究旨在探讨氯膦酸二钠脂质体(liposomal clodronate, LC)对ANP大鼠枯否细胞(Kupffer cell, KC)凋亡的作用。 方法：采用薄膜法制备LC；经大鼠胰腺被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠4ml／kg制作ANP模型,分离培养ANP大鼠Kupffer细胞,加入不同体积的Clodronate脂质体(50μl、100μl、150μl)进行干预,然后分别采用MTT法,流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测KC增殖、凋亡情况。 结果：所制备的脂质体直径100-200nm,Clodronate包裹率为(5.8%),透射电镜检查见其大小均匀。获得的KC形态正常,经瑞氏染色法鉴定纯度90%,台盼蓝染色,细胞存活率95%。在三种不同体积的LC干预24小时后,KC的抑制率分别为17.4%,24.2%和31.1%；流式细胞术检测发现,在三种不同体积LC干预下,KC凋亡率分别为(14.12±0.37)%,(18.74±0.43)%和(27.51±0.39)%,差异均有显著性(P0.01)；经1.2%琼脂糖凝胶电泳显示,随着Clodronate脂质体体积的增加,KC的DNA出现降解,逐渐呈现渐清晰的特征性梯状条带。 结论：利用薄膜法制备LC操作简单,方法易于掌握,我们在实验中成功制备出了LC,通过透射电镜发现其大小均匀。在本实验中,我们发现,LC对ANP大鼠KC生长具有明显抑制作用,并可诱导其凋亡。本实验为ANP的临床治疗提供了新的理论依据。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R576
【图文】：

腺被膜下注射均匀注射5%牛磺胆酸钠4m城g制作AN甲模图1ANP模型的建立Fig.IConstructionofANPmodelinfat的分离，纯化与培养

图3KC显微镜观察(HEx40)Fig.3TheObservationofKCinmieroscope脂质体形态、大小及脂质体中dodronate包裹率所制备的LC平均直径约100一200nm，包裹率为5.8%，透射电镜检查好，大小均匀。(图4)

2.3脂质体形态、大小及脂质体中dodronate包裹率所制备的LC平均直径约100一200nm，包裹率为5.8%，透射电镜检查见其形态良好，大小均匀。(图4)图4电镜下脂质体形态良好，大小均匀(x4000， x12000) Fig.4ThesPhericalshapeofliposome15goodandthesize15uniformin lransmissioneleetronmieroseope

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