硫酸类肝素3氧磺基转移酶B1抑制HBV复制的实验研究

发布时间：2020-08-21 06:39

【摘要】：乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界范围广泛流行,是危害人民健康和造成国民经济损失最严重的疾病之一。乙型肝炎发病机理尚未完全阐明,虽临床抗病毒治疗取得一定进展,但由于病毒变异快,临床耐药较为普遍,乙型肝炎的抗病毒治疗任重道远。本研究利用表达谱芯片比较了乙型肝炎病毒感染细胞(HepG2.2.15)与未感染母本细胞(HepG2)中基因表达差异,两种细胞中共有1305个基因表达差异在2倍以上。这些差异表达基因主要参与细胞生理功能、生化反应、另有部分基因具有催化活性,参与酶促反应。根据芯片结果,从差异表达基因中选取29条与感染及炎症反应、免疫应答、细胞功能相关基因作为候选基因,通过RT-PCR检测其在HepG2.2.15与HepG2细胞中RNA水平变化,在证实芯片可靠性同时关注感兴趣基因表达差异。从29条候选基因中最终选择肝细胞特异性硫酸类肝素3氧磺基转移酶(HS3ST3B1)作为研究对象,进一步研究其在HBV生活周期中的作用。在复制水平研究中,利用HS3ST3B1真核表达载体转染HBV稳定复制细胞HepGH7 96h后HBV复制受到明显抑制,该抑制作用呈剂量依赖性。在瞬时表达模型中,当利用RNA干扰技术抑制外源性HS3ST3B1表达后,HBV复制得到恢复。应用定点突变技术突变HS3ST3B1关键位点后,HS3ST3B1对HBV复制的抑制作用丧失。通过两种不同HBV感染模型证实HS3ST3B1能够特异性抑制HBV复制。在转录和翻译水平的研究同样发现HS3ST3B1导致HBV表面蛋白及核心蛋白表达下调、总RNA水平抑制,利用双荧光素酶报告对HBV不同启动子活性进行发现HS3ST3B1并未对HBV 4种启动子产生影响,提示HBV对转录及翻译水平的抑制可能发生在转录后水平。综上,本研究以表达谱芯片研究为基础,通过实验分析验证,发现一种新的HBV抑制因子HS3ST3B1,细胞研究发现HS3ST3B1对HBV复制具有强烈而特异的抑制作用。HS3ST3B1这一特点使其有望作为一种新兴的抗病毒药物应用于临床。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R512.62
【图文】：

基因芯片,细胞系,磺基转移酶,硫酸类肝素

后用于杂交分析。在实验过程中通过设定 OligoB2、Poly-A Controlybridization Controls 阳性对照、比较看家基因信号值及 3’/5’、平均背景值与值比值、Present Percent（P call %）数值判定芯片检测是否合格。本研究最片结果如下：张祯祯：硫酸类肝素3氧磺基转移酶B1抑制HBV复制的实验研究

条基,表达水平,全文数据库,博士学位论文

情况进行 RT-PCR 验证发现：在 29 条检测基因中，有 24 条检测基因与芯片表达相一致，假阳性率为 17.2%。（图 1-2）博士学位论文全文数据库 2011年第12期医药卫生科技辑 E0

病原体,宿主,疾病发生,芯片

图 1-6：HS3ST3B1 在 HepG2.2.15 及 HepG2 中 mRNA 及蛋白表达水平分析。左图为HS3ST3B1 mRNA 水平分析，右图为蛋白水平分析Fig 1-6: mRNA and protein level analysis of HS3ST3B1 between HepG2.2.15 and HepG2. Leftpanel: HS3ST3B1 mRNA change in 2 cell lines; Right panel: protein differentiation ofHS3ST3B1 in 2 cells.3．讨论在疾病发生过程中，宿主与病原体之间的博弈决定病情转归，了解宿主-病原体相互作用有助于认识疾病发生机理，同时也为疾病的治疗提供帮助。高通量芯片技术的推广应用，加速了宿主-病原体相互作用的研究。从最初的表达谱芯片开始，到近年来广泛应用的蛋白芯片、甲基化芯片、microRNA 芯片，这些芯片的应用极大便利了对宿主细胞转录、表达、以及转录表达调控水平的研究。生物信息学及系统生物学将芯片所得结果进行归纳处理，得到与疾病相关的基因和基

【参考文献】