抵抗素对NAFLD肝纤维化的影响及可能机制的体内外研究

发布时间：2020-08-21 17:36

【摘要】：目的 探讨抵抗素对非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver diseaseNAFLD)肝纤维化的影响及可能的体内外作用机制。 方法 应用高脂饲料喂养30只wistar大鼠建立NAFLD肝纤维化体内模型，随机分成对照组和模型组，各15只，分别喂以普通饲料和高脂饲料，分别在15、18、21周各处死10只（对照组5只，模型组5只）。苏木素-伊红染色（HE染色）、胶原纤维染色（VG染色）观察肝组织纤维化的情况，电镜观察HSC（肝星状细胞）的活化以及肝组织纤维化的情况；测定大鼠血清纤维化指标Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）、Ⅳ型胶原（CⅣ)、层粘连蛋白（LN)水平，采用半定量RT-PCR及Western blot法检测大鼠肝组织抵抗素表达，观察抵抗素和肝纤维化之间的变化趋势。选用重组抵抗素作用于HSC-T6建立NAFLD肝纤维化体外模型。用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养HSC-T6，细胞长满培养瓶75％后传代，待贴壁后分4组：A组（1640培养液）；B,C,D组分别于1640培养液中加入不同浓度抵抗素25ug/L，50ug/L，和100ug/L，各组细胞分别培养72小时后，检测细胞上清液中Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）、Ⅳ型胶原（CⅣ)、层粘连蛋白（LN)水平；采用半定量RT-PCR法检测HSC-T6中转化生长因子β-1（TGF-β1)mRNA及肿瘤坏死因子α（TNF-α)mRNA表达水平。分析抵抗素对HSC的作用机制。 结果 随着高脂饲料喂养大鼠时间的延长，大鼠肝组织出现纤维化变化，大鼠血清中肝纤维化指标Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）、Ⅳ型胶原（CⅣ)、层粘连蛋白（LN)水平逐渐升高，表明纤维化程度逐渐加重；大鼠肝组织内HSC活化，抵抗素表达逐渐增加。随着抵抗素浓度的增加， HSC-T6上清中纤维化指标Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）、Ⅳ型胶原（CⅣ)、层粘连蛋白（LN)水平逐渐升高，表明纤维化程度逐渐加重；细胞中TGF-β1mRNA及TNF-α mRNA表达增加。与对照组比较，各指标差异均有显著性（p值＜0.05或0.01）。 结论 动物模型中，抵抗素的表达增加，大鼠肝组织HSC活化，肝纤维化程度加重，大鼠血清中肝纤维化指标水平逐渐升高，但对抵抗素与纤维化的因果关系不甚清楚，所以建立体外细胞模型加以研究，研究表明抵抗素促使肝纤维化指标水平逐渐升高，TNF-α、TGF-β1mRNA表达增加，提示抵抗素可能通过作用于HSC,使其产生TNF-α、TGF-β1等炎症因子，诱导NAFLD肝纤维的发生发展。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R575.2
【图文】：

重庆医科大学硕士研究生学位论文(图1A、1B、1C，2A、2C)。电镜观察见肝细胞胞浆中见较多脂质空泡。狄氏内胶原原纤维增生，HSC胞浆内脂质空泡明显减少甚至消失（图2B、2C）。

重庆医科大学硕士研究生学位论文(图1A、1B、1C，2A、2C)。电镜观察见肝细胞胞浆中见较多脂质空泡。狄氏内胶原原纤维增生，HSC胞浆内脂质空泡明显减少甚至消失（图2B、2C）。

21周模型组肝脏HE200×Fig1-CTheliverofmodelgroupat21Week

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 王倩;管小琴;;大鼠非酒精性脂肪肝造模方法的改进[J];世界华人消化杂志;2007年11期

本文编号：2799659